[发明专利]可溶性表达EG95蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.可溶性表达EG95蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的可溶性表达EG95蛋白的编码基因。

3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的可溶性表达EG95蛋白的编码基因克隆入pGEX-3X载体中得到。

6.含有权利要求4所述重组表达载体的工程菌。

7.如权利要求6所述的工程菌，其特征在于，将重组表达载体转入大肠杆菌Rosseta(DE3)中得到，所述重组表达载体是将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的可溶性表达EG95蛋白的编码基因克隆入pGEX-3X载体中得到。

8.利用权利要求7所述工程菌制备可溶性表达EG95蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：将工程菌按1％接种量接入含100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃、150r/min振荡培养至OD_600nm值达0.6，加入IPTG至终浓度为0.25mM，37℃、150r/min振荡条件下诱导表达6h，得发酵菌液；将发酵菌液离心，沉淀用Buffer A洗涤后，按照重量体积比为1g:10mL加入Buffer A，以超声功率300W、每工作3s间歇3s的方式超声破碎120min，离心，取上清液，用Ni²⁺-NTA亲和层析系统纯化，得到可溶性表达EG95蛋白；

所述Ni²⁺-NTA亲和层析系统所用的平衡缓冲液为Buffer A，杂蛋白洗液为Buffer B，目的蛋白洗液为Buffer C；所述Buffer A是取NaCl 29.22g、1M pH8.0 Tris-HCl 20mL，加水定容至1000mL制得；Buffer B是取NaCl 29.22g、1M pH8.0 Tris-HCl 20mL、咪唑1.7g，加水定容至1000mL制得；Buffer C是取NaCl 29.22g、1M pH8.0 Tris-HCl 20mL、咪唑34g，加水定容至1000mL制得。

9.权利要求1所述的可溶性表达EG95蛋白在制备羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗中的应用。

10.以权利要求1所述可溶性表达EG95蛋白为抗原的羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗。