[发明专利]一种水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒及检测方法，属于试剂盒技术领域，试剂盒中包括：试剂1：1.211g Tris+100mL水+0.05mL盐酸+30.8mgDTT+5.23mg苯甲基磺酰氯+0.4gBSA+0.1％吐温‑100；试剂2：1.211gTris+100mL水+0.5g PEG4000+5μL巯基乙醇；试剂3：27mg UDP‑Gal；试剂4：23mgSA。水杨酸糖基转移酶与水杨酸反应生成水杨酸‑D‑葡萄糖，采用高效液相色谱仪测试反应得到的水杨酸‑D‑葡萄糖的浓度，即可得到水杨酸糖基转移酶的活性。本发明的试剂盒中试剂来源广泛、生产成本低，检测方法简单、灵敏度高。

技术领域

本发明属于试剂盒技术领域，具体涉及一种水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

在植物生长过程中，水杨酸(SA)作为一种重要的植物生长激素，在植物体的任何部位均有普遍存在，SA对植物的种子萌发、细胞呼吸、植株生长和衰老均具有重要的影响。在植物体内，适量水平的SA能够促进植物生长，而过量的SA会导致植物体生长缓慢，产生中毒现象，植物体对于过量的SA具有自我调节机制：例如，在植物体内普遍存在着水杨酸糖基转移酶(SAGT)，水杨酸糖基转移酶是一种降解酶，能够与SA反应，将SA糖基化，生成水杨酸-D-葡萄糖(SAG)，从而形成反馈抑制机制，消耗掉植物体内过量的SA，以促进植物的正常生长。

在科学研究中，研究水杨酸糖基转移酶的活性，可以更清晰地了解植物的生长过程，并对植物体内的生长激素进行科学性地调控，从而促进植物更好地生长。然而现有技术中暂无合适的检测方法来检测水杨酸糖基转移酶的活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒及检测方法，以解决背景技术中提出的技术问题。

为了实现上述目的，本发明公开了一种水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒，包括以下试剂：

试剂1：1.211g Tris(三羟甲基氨基甲烷)+100mL水+0.05mL盐酸+30.8mg DTT(二硫苏糖醇)+5.23mg苯甲基磺酰氯+0.4g BSA(牛血清白蛋白)+0.1％吐温-100；

试剂2：1.211gTris+100mL水+0.5g PEG4000+5μL巯基乙醇；

试剂3：27mgUDP-Gal(尿嘧啶二磷酸半乳糖)；

试剂4：23mg SA。

本发明同时要求保护一种水杨酸糖基转移酶活性的检测方法，使用了上述水杨酸糖基转移酶活性的检测试剂盒，包括如下步骤：(1)绘制水杨酸-D-葡萄糖的标准曲线；(2)从植物样本中提取水杨酸糖基转移酶；(3)采用提取的水杨酸糖基转移酶与SA进行反应；(4)仪器检测；(5)计算。

进一步地，步骤(1)中，配制多组浓度不同的水杨酸-D-葡萄糖标准溶液，采用高效液相色谱仪进行测试，得到一系列谱图，拟合得到谱图的峰面积与水杨酸-D-葡萄糖标准溶液浓度之间的标准曲线。

进一步地，步骤(2)中，采用试剂1提取植物样本中的水杨酸糖基转移酶。

进一步地，检测之前，将一定量的试剂2加入试剂3中混匀后，得到试剂5；将一定量的试剂2加入试剂4中，得到试剂6；步骤(3)中，在步骤(2)提取得到的水杨酸糖基转移酶中依次加入试剂5和试剂6，进行反应。

进一步地，步骤(3)中，将步骤(2)提取得到的水杨酸糖基转移酶在沸水浴中加热，然后冷却至室温后，再依次加入试剂5和试剂6进行反应，作为对照组；步骤(3)中，将步骤(2)提取得到的水杨酸糖基转移酶，未经沸水浴加热直接依次加入试剂5和试剂6进行反应，作为检测组。

进一步地，步骤(4)中，将对照组和检测组的产物采用高效液相色谱仪进行测试。