[发明专利]一种特立帕肽的纯化方法

权利要求书

1.一种特立帕肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以磷酸盐缓冲液为流动相A1，以乙腈为流动相B对特立帕肽粗肽溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分；

(2)将步骤(1)收集的洗脱组分以碳酸盐缓冲溶液为流动相A2，以乙腈为流动相B进行冲洗置换所述洗脱组分中的磷酸盐；

(3)转盐：以醋酸溶液为流动相A3，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，收集洗脱组分得醋酸特立帕肽。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为15％～25％，截至体积百分比为30％～40％，洗脱时间为60～100min；

优选地，步骤(1)中，所述磷酸盐选自磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾中的任意一种或任意混合；

优选地，步骤(1)中，所述磷酸盐缓冲液的浓度以磷酸根的浓度计为5～500mmol/L；进一步优选为20～200mmol/L；

优选地，步骤(1)中，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.0～8.0。

3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述特立帕肽粗肽溶液为将特立帕肽粗肽溶于乙腈和水的混合溶液；所述乙腈的体积百分比为5％～15％。

4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述流动相B乙腈的体积百分比为5％～15％，所述冲洗时间为10～30min。

5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述碳酸盐选自碳酸铵、碳酸氢铵、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾和碳酸氢钾中的任意一种或几种；

优选地，步骤(2)中，所述碳酸盐缓冲溶液的浓度为5～500mmol/L；进一步优选为20～200mmol/L；

优选地，步骤(2)中，所述碳酸盐缓冲溶液以醋酸调节pH为6.0～8.0；

优选地，步骤(2)中，所述冲洗前，需将步骤(1)得到的洗脱组分进行稀释；所述稀释为用水进行稀释，具体为0.8～1.5倍体积的水进行稀释。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为5％～15％，截至体积百分比为50％～70％，洗脱时间为30～60min；

优选地，步骤(3)中，所述醋酸溶液的浓度为0.005％～0.05％。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法采用反相制备色谱柱；所述反相制备色谱柱的内装填料选自反相C18、C8和C4中的任意一种；

优选地，所述内装填料的粒径为5～10μm；所述内装填料的孔径为5～30nm。

8.根据权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)与步骤(3)中，所述反相制备色谱柱的上样量为其内装填料质量的0.5％～5.0％，进一步优选为1.0％～3.0％。

9.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述梯度洗脱还包括前处理，所述前处理包括过滤和平衡制备色谱柱；所述平衡制备色谱柱为以所述流动相A1和流动相B平衡制备色谱柱，其中流动相B的体积百分比为5％～15％。

10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(3)中，还包括后处理，所述后处理包括减压旋蒸和冻干。