[发明专利]一种强活性的水稻启动子序列及验证方法

说明书

本发明公开了一种强活性的水稻启动子序列及验证方法，基因序列如SEQ ID NO.1。方法包括：(1)OsUBQ启动子序列扩增，构建OsUBQ驱动GFP的表达载体；(2)Ubi1启动子序列扩增，构建由Ubi1驱动的GFP表达载体；(3)使用CaMV35S启动子为正对照；(4)水稻原生质体制备与转化；(5)在瞬时表达系统通过荧光强度评估三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1活性。本发明的水稻启动子序列，本质是DNA分子，1405bp，能够启动基因的表达并且活性更强。

技术领域

本发明涉及启动子及验证方法，特别涉及一种强活性的水稻启动子序列及验证方法。

背景技术

植物启动子在转录水平上对基因的表达调控起着非常重要的作用。大多数启动子位于基因5’端转录起始位点上游。启动子序列包含基因转录所需的RNA聚合酶复合物的结合位点及转录因子结合位点，当基因被调控表达时，这些位点能够被转录因子特异性识别和结合，进而招募RNA聚合酶组装成复合体，启动子决定起始位置和转录的方向。研究表明，大多数启动子位于染色体上的开放染色质区域。在基因工程研究中，启动子是影响外源转基因表达效率的重要因素之一。实践上需要高效的启动子用于驱动外源基因表达，以便在转基因植株中获得较好的农艺性状。因此，组成型表达的强启动子具有较广的应用前景。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种强活性的水稻启动子序列。

本发明另一目是提供所述强活性的水稻启动子序列的验证方法。

技术方案：本发明提供一种强活性的水稻启动子序列，基因序列如SEQ ID NO.1。

进一步地，用引物以粳稻日本晴(Oryza sativa L.spp.Japonicavar.Nipponbare)的基因组DNA为模板，扩增得到1405bp的扩增产物，即SEQ ID NO.1。

进一步地，所述引物序列如下：

正向F：5’-CTGCAAATACTGCAAAGAAT-3’；

反向R：5’-AAGAGGCGAGGAGGGGGTGG-3’。

进一步地，

所述的水稻启动子活性检测的具体方法，如下：

1)LOC_Os06g46770基因在各个组织中表达量较高，为组成型表达。在它的转录起始位点上游的1405bp序列，定义为启动子序列OsUBQ(SEQ ID NO.1)。

2)为验证OsUBQ启动子活性，构建OsUBQ驱动GFP的表达载体。

3)已发表的该基因Ubil启动子序列与本实验中预测的启动子之间的序列分析。

4)Ubi1启动子序列扩增，构建由Ubi1驱动的GFP表达载体。

5)使用CaMV35S启动子为正对照。

6)水稻原生质体制备与转化。

7)在瞬时表达系统评估三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1活性。

鉴定原理：

研究发现大多数启动子位于染色体上的开放染色质区域。通常启动子位于基因转录起始位点上游。利用启动子的位置特征和开放染色质图谱可以有效预测基因的启动子区。本发明中发现LOC_Os06g46770基因的启动子OsUBQ，在瞬时表达体系中其活性较强，强于与已发表的Ubi1启动子。

有益效果：本发明的水稻启动子序列，本质是DNA分子，1405bp，能够启动基因的表达并且活性更强。

附图说明

图1 LOC_Os06g46770基因结构示意图；