[发明专利]一种同时测定奶粉中维生素K1

权利要求书

1.一种同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：采用酶解法处理待测奶粉，得到进样溶液；

S2：采用在线固相萃取-液相色谱联用对S1中所述进样溶液中的维生素K₁和K₂进行提取检测，得到液相色谱数据；

S3：根据维生素K₁和K₂的液相色谱标准工作曲线，得到待测奶粉中维生素K₁和K₂的含量。

2.根据权利要求1所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，所述S1包括：采用脂肪酶酶解奶粉样品得到混合溶液，加入蛋白质变性剂定容，取定容后的溶液过滤，得到进样溶液。

3.根据权利要求2所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，所述脂肪酶的浓度为0.05g/mL～0.5g/mL。

4.根据权利要求2所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，所述酶解为恒温酶解，所述恒温酶解的温度为30℃～40℃，时间为2h～3h。

5.根据权利要求2所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，所述蛋白质变性剂为异丙醇和强碱或异丙醇和强酸。

6.根据权利要求5所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，所述强碱在所述进样溶液中的浓度为0.15mol/L～0.35mol/L；所述强酸在所述进样溶液中的浓度为0.5mol/L～1.2mol/L。

7.根据权利要求1所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，S2中所述在线固相萃取的运行条件如下：

色谱柱：PLRP-S柱；

流动相：甲醇、甲醇-水溶液、甲醇-乙腈混合溶液；

流动相比例与流速：0min～2min，V_甲醇:V_水＝2：8，υ＝1.2mL/min；

2.10min～6.00min，甲醇，υ＝1.5mL/min；

6.10min～14min，V_乙腈:V_甲醇＝1：1，υ＝1mL/min；

14.10min～35min，V_甲醇:V_水＝2：8，υ＝1mL/min；

进样体积：50μL。

8.根据权利要求1所述的同时测定奶粉中维生素K₁和K₂的方法，其特征在于，S2中所述液相色谱的运行条件如下：

色谱柱：C₁₈柱，锌粉还原柱；

流动相：A，所述A为含有四氢呋喃的甲醇溶液；

流动相比例与流速：

0min～8min，体积分数为10％的A，υ＝0.6mL/min；

8.10min～13min，体积分数为10％的A，υ＝0.8mL/min；

13min～20min，(V_{体积分数为20％的A}：V_{体积分数为10％的A}＝80:20)，υ＝0.8mL/min；

21min～30min，(V_{体积分数为20％的A}：V_{体积分数为10％的A}＝85:15)，υ＝0.8mL/min；

31min～35min，体积分数为10％的A，υ＝0.6mL/min。