[发明专利]一种抗体的纯化方法

权利要求书

1.一种抗体的纯化方法，包括以下步骤：

a)细胞发酵液沉淀；

b)复合模式层析以捕获抗体；

c)再次层析分离抗体以对抗体进行精细纯化；

其中，步骤a)中的发酵液以酸性溶液调节发酵pH至设定值，静置30-60分钟后离心获得含抗体粗品的上清液，所得发酵液电导率不超过20mS/cm；将步骤(a)中获得的发酵液加载到步骤b)的预处理好的复合模式层析填料上，用平衡缓冲液清洗复合模式层析填料、用洗脱缓冲液洗脱并收集洗脱液；步骤c)中再次层析分离抗体的方式包括亲和层析、疏水层析或阳离子交换层析中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，步骤a)的调节pH的酸性溶液包括冰乙酸、盐酸、柠檬酸中的至少一种，优选柠檬酸。

3.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，所述酸性溶液的浓度为2mol/L，调节发酵pH至4-5，优选4.5±0.2。

4.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，步骤a)的静置时间为45分钟。

5.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，步骤b)复合模式层析填料为Capto MMC；

平衡缓冲液含有浓度为50mmol/L的NaAC-HAC溶液，pH为4.5-5.5，优选PH为5.5；

洗脱缓冲液含有浓度为200mmol/L的Tris-HCl和浓度为1mol/L的NaCl溶液，pH为8.0。

6.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，步骤c)中再次层析分离抗体的方式为疏水层析和阳离子交换层析两步法。

7.根据权利要求6的方法，其中所述疏水层析填料为Phenyl，阳离子交换层析填料为SPFF；

所述Phenyl疏水层析时的平衡缓冲液含有浓度为20mmol/L的PB和浓度为1.1mol/L的(NH)₄SO₄溶液，pH为7.0，

洗脱缓冲液含有浓度为20mmol/L的PB溶液，pH为7.0；

所述SPFF阳离子交换层时平衡缓冲液含有浓度为20mmol/L的Na₂HPO₄·12H₂O-柠檬酸溶液，pH为5.2，

洗脱缓冲液含有浓度为20mmol/L的Na₂HPO₄·12H₂O-柠檬酸溶液和浓度为0.5mol/L的NaCl溶液，pH为5.2。

8.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，其中在步骤b)之后、步骤c)之前还包括低pH孵育病毒灭活的步骤。

9.根据权利要求1所述的抗体的纯化方法，其特征在于，在步骤c)之后还包括除病毒过滤、超滤浓缩的步骤。

10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述抗体为TNF-α单克隆抗体。

11.一种使用权利要求1-10中任一项所述的抗体的纯化方法纯化得到的抗体。

12.权利要求1-11中任一项所述的抗体的纯化方法在制备抗体药物中的应用。