[发明专利]糖类抗原CA72-4的检测试剂盒

说明书

本申请涉及糖类抗原CA72‑4的检测试剂盒。该试剂盒包含第一试剂、第二试剂和任选地校准品。第一试剂包含缓冲液、分散剂、促凝剂、阻断剂、表面活性剂和防腐剂；第二试剂包含缓冲液、CA72‑4抗体包被的胶乳微球、蔗糖、酪蛋白、防腐剂。本申请的试剂盒准确性、线性、精密度和稳定良好。

技术领域

本公开涉及医学、免疫和体外诊断领域；具体涉及一种免疫透射比浊法的糖链抗原72-4(CA72-4)的检测试剂盒。

背景技术

CA72-4是由cc49和B72.3两株单抗识别的黏蛋白类的糖类抗原。CA72-4分子量为220kD至400kD。它是在1981年由Colcher等通过乳腺癌的肝转移病区的癌细胞膜成分免疫小鼠得到的IgG单克隆抗体，能够识别TAG72蛋白。

CA72-4可存在于胃癌、结直肠癌、乳腺癌等的恶性组织中，但在非上皮性的恶性肿瘤及良性增殖性病变中无该抗原的表达。因此，诊断恶性肿瘤的特异性更强。近年来，CA72-4已被应用于临床用来检测胃癌、卵巢癌、结直肠癌、非小细胞肺癌等疾病的诊断。

CA72-4目前的检测方法学集中在化学发光平台和酶联免疫平台。检测方法如下主要有：电化学发光法、磁微粒化学发光法、酶联免疫法(DRG Instruments GmbH德国)。

例如，CN102288767A公开了一种CA72-4的定量测定试剂盒，其包含CA72-4磁分离试剂、酶反应物、反应增强剂、稀释液。

CN104931703A提供一种CA72-4的免疫磁珠试纸条，所述试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和背衬板；试纸条上标记有抗CA72-4单克隆抗体CC49和抗CA72-4单克隆抗体B72.3。通过所述试纸条进行免疫层析后，用磁强度检测仪分析获得CA72-4的定量结果。

CN105092852A提供一种检测CA72-4的荧光免疫试纸条，所述试纸条包括样品垫、量子点标记结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸；所述量子点标记结合垫上设置有量子点标记的抗CA72-4单克隆抗体CC49涂层；检测线上设置有抗CA72-4单克隆抗体B72.3。通过所述试纸条进行免疫层析后，用荧光免疫层析芯片检测仪分析获得CA72-4的定量结果。

化学发光法灵敏度高、特异性强、精密度好，但试剂及配套仪器价格昂贵、检测通量小，不适用于基层医院。随着分级医疗政策的推行，基层医院患者流量增大，但基层医院对成本控制依然比较敏感。

因此，很有必要开发一种可定量的、适用于普通生化分析仪的高通量的CA72-4检测试剂。

发明内容

根据一些实施方案，提供了一种用于确定CA72-4水平的试剂盒，其包含第一试剂和第二试剂。

本申请中，CA72-4是指人CA72-4。该术语包括CA72-4在体内整个周期各阶段中的各种形式分子，例如但不限于CA72-4基因在扩增、复制、转录、剪接、加工、翻译、修饰过程中所产生的分子，例如前体蛋白、成熟的蛋白、天然存在的变体、修饰的蛋白、或其片段。

“确定CA72-4水平”是指确定样本中CA72-4存在的量，尤其是蛋白质水平的量。

本申请中“第一”、“第二”等序数词，仅用于区分不同的产品、步骤、特征、活性成分，不代表特定的顺序、等级或程度。

在一些具体的实施方案中，第一试剂包含以下或由以下组成：

甘氨酸缓冲液 0.01M至0.2M(例如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20M、或任意两个数值间的范围)；