[发明专利]用于靶向连接蛋白半通道的组合物和方法

说明书

提供了用于靶向连接蛋白半通道的组合物和方法。具体提供了一种单克隆抗体，其包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:10的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列。还提供了采用所述单克隆抗体检测总的和细胞表面的Cx43半通道的存在性、水平和活性的方法，以及用于鉴定打开连接蛋白半通道的化合物、条件和/或处理的方法。

优先权段落

本申请是要求2013年8月21日提交的美国临时专利申请序列号61/868,112的优先权的国际申请，所述临时申请整体以引用方式并入本文。

技术领域

本申请属于生物医学领域。具体涉及一种单克隆抗体，其包含SEQ ID NO:2、SEQID NO:6或SEQ ID NO:10的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:4的轻链氨基酸序列。还提供了采用所述单克隆抗体检测总的和细胞表面的Cx43半通道的存在性、水平和活性的方法，以及与半通道相关的多种方法，包括用于鉴定打开连接蛋白半通道的化合物、条件和/或处理的方法。

背景技术

骨组织是乳腺癌和前列腺癌转移的优选位点。骨转移出现在高达75％的晚期癌患者中。目前，还无法治愈转移性乳腺癌，也无用于治疗骨转移的副作用极低的可靠干预药物。

骨关节炎(OA)是一种影响着大约20％的美国成年人的普遍性疾病。该疾病导致关节(包括关节软骨和软骨下骨)的退化。OA的病理特征在于关节软骨的丧失，从而导致关节空间变窄、关节摩擦增加和可能的结构重塑。当前的治疗包括锻炼、生活方式改变和止痛剂。如果症状变严重，则通常施行关节置换术。迄今为止，尚无可用于治疗OA的特定药物干预措施。

连接蛋白半通道在细胞和组织功能中发挥着重要作用，并且已知连接蛋白半通道的功能异常会导致各种病理病症。因此，仍需要用于治疗与半通道活性相关的病理病症(例如炎症、骨关节炎或骨转移)的另外疗法以及用于确定此类疗法的方法。

发明内容

本发明人已发现：转移靶标的细胞中打开的半通道对癌生长、迁移和转移具有抑制作用。某些实施方案提供用来鉴定调节半通道的打开以治疗癌转移的化合物的工具和/或方法。在某些方面，可将药物用于抑制或缓解癌症向骨、脑或肝的转移。在某些方面，半通道可在骨、脑或肝细胞中表达。在又一个方面，半通道可以是骨细胞半通道、肝细胞半通道或星形胶质细胞半通道。在某些方面，半通道可以是连接蛋白Cx43、Cx32、Cx46、Cx37、Cx40、Cx50、Cx59、Cx62、Cx26、Cx31、Cx30.3、Cx31.1、Cx30、Cx25、Cx45、Cx47、Cx30.2、Cx36、Cx31.9、Cx39、Cx40.1、Cx23或Cx29半通道。在某一方面，半通道是Cx43或Cx 32半通道。例如，骨细胞中连接蛋白43(Cx43)半通道的打开对向骨骼的转移具有抑制作用，并可抑制骨转移。

半通道打开可通过使用比如荧光黄(Lucifer yellow)、溴化乙锭、Alexa 350、Alexa 485、Alexa 594染料等荧光染料进行的染料摄取测定法进行检测。半通道打开的特异性可通过使用抑制半通道打开并因此抑制靶向试剂活性的连接蛋白特异性抗体进行验证。因此，所述工具和/或方法可用于筛选、测试和鉴定打开半通道并抑制转移的试剂。

某些实施方案涉及鉴定打开半通道的化合物的方法。其它实施方案涉及正调节半通道的打开以抑制或缓解骨转移的方法。

本发明提供抗半通道的抗体，编码此类抗体和治疗性蛋白的核酸，制备抗半通道单克隆抗体和其它治疗性蛋白的方法，以及用于治疗诸如转移癌的疾病的方法。在某些方面，该抗体结合具有FLSRPTEKTI(SEQ ID NO:13)、KRDPCPHQVD(SEQ ID NO:14)或LSAVYTCKR(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列的表位。在一个特定的方面，抗体结合具有FLSRPTEKTI(SEQID NO:13)的氨基酸序列的表位。