[发明专利]血液游离DNA提取试剂盒及核酸提取方法

权利要求书

1.一种血液游离DNA提取试剂盒，包括第一漂洗液，第二漂洗液，洗脱液，其特征在于，还包括

裂解液：1M-6M异硫氰酸胍溶液、10mM-1M pH6.0-7.2的Tris-HCl缓冲液、1mM-100mM乙二胺四乙酸缓冲液、体积比为10%-30%的异丙醇溶液、质量体积比为0.05%-0.2%的十二烷基硫酸钠缓冲液、体积比1%-10%的曲拉通X-100、0.5M-1M的氯化钠溶液；

蛋白酶K缓冲液：1mM-10mM的氯化钙溶液、体积比为30%-60%的甘油溶液、1mM-100mM的海藻糖溶液、1mM-100mM的Trizma Base 缓冲液、体积比为0.01%-1%的Proclin-300；使用前，向所述蛋白酶K缓冲液中溶解蛋白酶K，浓度在10-40mg/mL。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述第一漂洗液，包括：1M-6M异硫氰酸胍溶液，10mM-1M pH6.0-7.2的Tris-HCl缓冲液，1mM-100mM乙二胺四乙酸缓冲液，体积比10%-30%的异丙醇溶液。

3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述第二漂洗液，包括：1mM-100mM的Trizma Base缓冲液，使用前向所述第二漂洗液中添加1-10倍体积的无水乙醇。

4.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述洗脱液，包括：0.01mM-10mM乙二胺四乙酸缓冲液，1mM-100mM的Trizma Base缓冲液。

5.一种采用如权利要求1所述血液游离DNA提取试剂盒的核酸提取方法，其特征在于，方法具体如下：

S1. 在血清或血浆样品中加入裂解液和蛋白酶K缓冲液，振荡混匀，56-70℃水浴30-60min，其间每10-15min涡旋混匀数次；

S2. 将离心管取出，加入无水乙醇和磁珠，颠倒混匀数次，期间静置数秒后继续颠倒混匀，将离心管置于磁力架上，磁分离，吸弃废液；

S3. 将离心管从磁力架上取下，加入第一漂洗液，颠倒混匀数次，期间静置数秒后继续颠倒混匀，将离心管置于磁力架上，磁分离，吸弃废液；

S4. 将离心管从磁力架上取下，加入第二漂洗液，颠倒混匀数次，期间静置数秒后继续颠倒混匀，将离心管置于磁力架上，磁分离，吸弃废液；

S5. 重复步骤S4一次；

S6. 将离心管从磁力架上取下，室温下开盖静置晾干，加50-100μL入洗脱液，置于水浴锅中，56-70℃水浴5-10min；

S7. 将离心管置于磁力架上，磁分离，小心吸取上清至新的离心管中，进行下游实验或-20℃保存备用。