[发明专利]高效液相色谱法检测血浆吲哚类物质的试剂盒及其应用

权利要求书

1.高效液相色谱法检测血浆吲哚类物质的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括以下试剂：

(1)流动相：

流动相A：10mmol/LNaH₂PO₄溶液；

流动相B：甲醇；

(2)标准品储备液：

含吲哚乙酸(Indole-3-acetic acid，IAA)、吲哚丙酸(Indole-3-propionate，IPA)、吲哚(Indole，IND)及3-甲基吲哚(3-Methylindole，3-MI)的甲醇溶液以及含硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate，3-INDS)的甲醇水溶液；

(3)内标液：甲萘酚的甲醇溶液；

(4)萃取液：乙醚/乙酸乙酯。

2.按权利要求1所述的高效液相色谱法检测血浆吲哚类物质的试剂盒，其特征在于：标准品储备液为含有100.00μmol/L IAA、60.00μmol/L IPA、4.00μmol/L IND、4.00μmol/L 3-MI甲醇溶液以及含4.00mmol/L 3-INDS标准品的甲醇水溶液。

3.按权利要求1所述高效液相色谱法检测血浆吲哚类物质的试剂盒，其特征在于：所述内标液为10.00mg/L甲萘酚的甲醇溶液。

4.按权利要求1所述的高效液相色谱法检测血浆吲哚类物质的试剂盒，其特征在于：所述萃取剂中乙醚与乙酸乙酯的体积比为2:1。

5.按权利要求1～4任意一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于：

(1)流动相：

流动相A：10mmol/LNaH₂PO₄溶液；

流动相B：甲醇；

(2)标准品储备液：用甲醇分别配制100.00μmol/L IAA、60.00μmol/L IPA、4.00μmol/LIND及4.00μmol/L 3-MI标准品储备液，用50％甲醇配制4.00mmol/L 3-INDS标准品储备液。

(3)内标液：用甲醇配制10.00mg/L甲萘酚；

(4)萃取液：乙醚和乙酸乙酯按照体积2:1混合，涡旋混匀。

6.按权利要求1～4任意一项所述的试剂盒的应用，其特征在于：采用高效液相色谱技术检测经过预处理的血浆中5种吲哚类物质。

7.按权利要求6所述的试剂盒的应用，其特征在于：

(1)样本预处理：取EDTA抗凝血浆300μL，加入10μL内标溶液，再加入乙醚/乙酸乙酯混合萃取剂810μL，涡旋混匀，于25℃以150rpm的速率振摇15min；13,300g离心10min，取上清，真空离心浓缩干燥后复溶于90μL流动相中；

(2)色谱条件：

色谱柱：Shim-PackVP-ODS(150mm×4.6mm，4.6μm)；

流动相A：10mmol/LNaH₂PO₄溶液；流动相B：甲醇；等度洗脱，流动相A的比例为40％；

流速：0.8mL/min；

柱温：35℃；

荧光检测器：激发波长为280nm，发射波长为355nm；

进样量：50μL。