[发明专利]一种综合多种育种技术改良葡萄牙牡蛎三倍体生产性能的方法

权利要求书

1.一种综合多种育种技术改良葡萄牙牡蛎三倍体生产性能的方法，其特征在于，具体步骤为：

步骤A、二倍体快速生长系选育：①分别搜集3-5个太平洋牡蛎二倍体地理群系和葡萄牙牡蛎二倍体地理群系，进行群体内自繁，分别布置在3个养殖海区中培和养成，以生长和存活为目标性状，进行基因型和环境型交互作用分析，筛选得到太平洋牡蛎二倍体优良群体X₀和葡萄牙牡蛎二倍体优良群系Y₀；②分别筛选X₀和Y₀壳高前10%且壳型整齐的个体作为亲本，进行群系内自繁，得到X₁和Y₁；③以壳高为选育目标，每代留种率为10%，再持续选育3代，选育得到太平洋牡蛎二倍体快速生长系G₀和葡萄牙牡蛎二倍体快速生长系A₀；

步骤B、三倍体诱导系构建：①分别取400-500个太平洋牡蛎二倍体快速生长系G₀和葡萄牙牡蛎二倍体快速生长系A₀的个体，测量其壳高和全重，并按大小排列，取10%个体为亲本，在循环水系统中暂养一周，投喂足量饵料；②暂养后的亲贝，鉴定雌雄，筛选配子质量好的个体进行人工受精，在受精后第一极体Pb1出现40%时，用0.50 mg/L的细胞松弛素B诱导处理30 min，洗卵并选优幼虫；③用流式细胞仪鉴定三倍体率，保留三倍体率超过90%且畸形率低于10%的组，精细化培育幼虫，在海区中培和养成，此即为太平洋牡蛎三倍体诱导群系和葡萄牙牡蛎三倍体诱导群系；

步骤C、四倍体群系构建：①分别取牡蛎二倍体快速生长系的100-200个成体和牡蛎三倍体诱导群系的300-400个成体，取壳高前10%个体作为亲本，在循环水系统中暂养一周，投喂足量饵料；②鉴定牡蛎三倍体诱导群系中可育个体和倍性，挑选出大个雌性个体作为母本；筛选牡蛎二倍体快速生长系中雄性个体作为父本；进行人工受精，受精后第一极体出现50%时，用0.60mg/L的细胞松弛素B处理55 min，放入海水中孵化并选育幼虫；③用流式细胞仪鉴定四倍体率，保留四倍体率超过90%的组，精细化培养幼虫，此即为太平洋牡蛎四倍体快速生长系和葡萄牙牡蛎四倍体快速生长系；

步骤D、杂交四倍体快速生长系构建：①分别取步骤C中太平洋牡蛎四倍体快速生长系和葡萄牙牡蛎四倍体快速生长系各200-300个个体，流式细胞仪鉴定倍性，测量其壳高和全重，取前5%留种，暂养在循环水系统中一周；②以留种的太平洋牡蛎四倍体快速生长系为父本，留种的葡萄牙牡蛎四倍体快速生长系为母本，人工杂交受精，孵化并选优，精细化培养幼虫和稚贝，得到杂交四倍体快速生长系；

步骤E、葡萄牙牡蛎三倍体回交改良系规模化生产：① 取步骤D中杂交四倍体快速生长系，鉴定倍性并筛选壳高前5%雄性个体作为四倍体父本；取步骤A中葡萄牙牡蛎二倍体快速生长系个体并筛选壳高前10%雌性个体作为母本，进行回交育种和人工授精，孵化并选优幼虫；②精细化培育幼虫，投放附着基采集苗种，此即为葡萄牙牡蛎三倍体改良系。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，太平洋牡蛎不同群系构建时，亲贝暂养及受精海水环境条件为温度26-29 ℃和盐度为26-28 ppt；葡萄牙牡蛎不同群系构建时，亲贝暂养和受精海水环境条件为温度29-31℃和盐度为25-27 ppt。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，配子的筛选原则为：筛选的精子活力好且精母细胞比例低，筛选的卵子为核内位置丰富、呈椭圆形或梨形、大小较为均匀。