[发明专利]一种携带核酸药物的细胞外泌体及其制备方法与在免疫治疗中的应用

说明书

本发明公开了一种携带核酸药物的细胞外泌体及其制备方法与在免疫治疗中的应用，所述外泌体是巨噬细胞来源的外泌体（Macrophage‑derived Extracellular Vesicles，Mac‑EVs）,所携带的核酸药物siRNA为siCCR2，该Mac‑EVs^siCCR2经静脉注射可有效降低脓毒血症患者体内的炎症风暴水平。

技术领域

本发明涉及生物技术，涉及一种携带核酸药物的细胞外泌体及其制备方法与在免疫治疗中的应用，具体涉及一种携带siCCR2的细胞外泌体及其制备方法与在脓毒血症治疗中的应用。

背景技术

外泌体（Extracellular Vesicles，EVs）是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡（30-150nm），多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关外泌体分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA），有时称为短干扰RNA（shortinterfering RNA）或沉默RNA（silencing RNA），为一种长20～25个核苷酸的小分子RNA，在生物学上有许多不同的用途。目前已知siRNA主要参与RNA干扰（RNAi）现象，以带有专一性的方式调节基因的表达。此外，也参与一些与RNAi相关的反应途径，例如抗病毒机制或是染色质结构的改变。不过这些复杂机制的反应途径目前尚未明了。

发明内容

针对脓毒血症存在治疗效果还需改善、治疗花费高的问题，本发明公开了一种携带核酸药物的细胞外泌体及其制备方法与在脓毒血症治疗中的应用。

本发明采用如下技术方案：

一种携带核酸药物的细胞外泌体，由巨噬细胞外泌体与核酸药物组成；所述核酸药物为siCCR2。

发明公开了上述携带核酸药物的细胞外泌体的制备方法为，采用电转程序，将核酸药物电转至巨噬细胞外泌体内，得到携带核酸药物的细胞外泌体。

本发明公开了上述携带核酸药物的细胞外泌体在脓毒血症治疗中的应用；或者在制备脓毒血症治疗药物中的应用。

本发明中，将巨噬细胞离心去除细胞沉淀，收集上清，再经超高速离心收集巨噬细胞外泌体，然后进行核酸药物电转程序，将核酸药物电转至巨噬细胞外泌体内，得到携带核酸药物的细胞外泌体。优选的，超高速离心为80000～120000g离心50～100分钟；优选的，上清过滤后经过8000～12000g离心去除细胞碎片后，再次获得的上清再经超高速离心，收集沉淀为细胞外泌体。

脓毒血症是机体感染后引起的一种全身性免疫反应，研究表明脓毒症引起细胞因子风暴特别是TNF、IL-1、IL-6等因子大量释放从而加重炎症反应，抑制天然免疫系统被激活不利于清除入侵细菌；本发明首次以巨噬细胞高亲和性的外泌体为载体，装载siCCR2，改善脓毒血症。实验结果表明Mac-EVs^siCCR2提高脓毒症小鼠的存活率，减轻肺水肿和肺部炎症情况，降低脓毒症小鼠肺部的炎症反应；尤其与干细胞外泌体相比，巨噬细胞外泌体做载体低脓毒症小鼠体内的炎症风暴效果明显优于干细胞外泌体做载体。

附图说明

图1为鼠的存活率；

图2为减轻肺水肿；

图3为肺部炎症情况；

图4为肺的流式图。

具体实施方式