[发明专利]层析过程病毒灭活的方法及其应用在审
| 申请号： | 202111563257.4 | 申请日： | 2021-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN114106086A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 周佳豪;柳帆邹;徐晓渊;张赶;杨晓明;叶峰 | 申请（专利权）人： | 苏州创胜医药集团有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/18 | 分类号： | C07K1/18;C07K1/34;C07K1/36 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 宋南 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 层析 过程 病毒 方法 及其 应用 | ||
1.层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，包括如下步骤：
调节细胞发酵液的pH至5.0～5.5后进行深层过滤处理，将滤出液进行阳离子层析上样，冲洗处理后，采用pH为3.4～3.8的缓冲液冲洗阳离子层析柱后，静置30min以上，洗脱。
2.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述pH为3.4～3.8的缓冲液包括醋酸钠-醋酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液和柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的任一种或多种；
优选的，所述缓冲液的浓度为20～100mM；
优选的，所述缓冲液的pH为3.4～3.6。
3.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述阳离子层析的填料包括POROS 50HS、POROS 50XS、Capto S Impact、Eshmono CPX、Monomix HC60-SP和NanoGel 50SP中的任一种或多种。
4.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述阳离子层析的填料的装柱高度为15～25cm；
优选的，所述阳离子层析的线性流速为200～400cm/hr。
5.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，采用pH为3.4～3.8的缓冲液冲洗阳离子层析柱3～5CV。
6.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述静置的时间为30～90min；
优选的，所述静置的时间为30～60min。
7.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述洗脱包括pH梯度洗脱、pH等度洗脱、盐梯度洗脱和盐等度洗脱中的任一种或多种。
8.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述深层过滤处理包括：二级深层过滤；
优选的，所述深层过滤处理还包括在所述二级深层过滤前的初级深层过滤；
优选的，所述二级深层过滤的过滤器为二级深层滤膜；所述二级深层滤膜的孔径为0.02～0.5μm；所述初级深层过滤的过滤器为初级深层滤膜；所述初级深层滤膜的孔径为0.5～10μm；
优选的，所述二级深层滤膜包括A1HC、X0HC、X0SP、PDE2和H0HP中的任一种；
优选的，所述初级深层滤膜包括D0HC、D0SP、PDH4和4070中的任一种。
9.根据权利要求1所述的层析过程病毒灭活的方法，其特征在于，所述细胞发酵液中的目标蛋白种类包括：单抗、双抗和Fc融合蛋白中的任一种。
10.权利要求1-9任一项所述的层析过程病毒灭活的方法在蛋白纯化中的应用；
优选的，采用所述层析过程病毒灭活的方法对蛋白进行捕获和灭活。
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