[发明专利]CEY17_RS00300基因突变体及其在制备L-缬氨酸中的应用

说明书

本发明公开了CEY17_RS00300基因突变体及其在制备L‑缬氨酸中的应用。具体地公开了突变蛋白质CEY17_RS00300^V184M及其编码基因。本发明构建了包含点突变(G‑A)的基因工程菌，以及过表达CEY17_RS00300基因或CEY17_RS00300^G550A基因的工程菌。实验表明，CEY17_RS00300基因及其变体参与了L‑缬氨酸的生物合成，对CEY17_RS00300基因编码区进行点突变或在生产菌中过表达CEY17_RS00300基因和/或其突变体，有助于L‑缬氨酸产量及转化率的提高，可以培育符合工业化生产的高产高质量菌种，对L‑缬氨酸的工业化生产具有重要的意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及CEY17_RS00300基因突变体及其在制备L-缬氨酸中的应用。

背景技术

L-缬氨酸化学名称为2-氨基-3-甲基丁酸，属于支链氨基酸，是人体必需的8种氨基酸和生糖氨基酸，它能促进身体正常生长，修复组织，调节血糖，并提供需要的能量。可用异丁醛作原料合成。为白色结晶或结晶性粉末，在水中溶解，在乙醇中几乎不溶。L-缬氨酸是一种必需氨基酸，这意味着身体本身不能生产，必须通过膳食来源获得补充。L-缬氨酸具有增强机体的免疫防护作用，抗中枢疲劳，抗外周疲劳，加快运动后机体的修复等作用，因此在食品、医药、化妆品行业具有广泛的应用及商业价值。L-缬氨酸含有特殊的生理功能，市场需求量大，使得L-缬氨酸的生产备受关注。

目前，L-缬氨酸的生产方法主要有提取法、化学合成法、发酵法。化学合成法的特点是生产成本高，反应复杂，步骤多，且有许多副产物，污染严重，难以实现工业化生产。微生物发酵法生产具有原料成本低，反应条件温和及可大规模生产等优点，是一种非常经济的生产方法，发酵法生产的缬氨酸皆为L-型，无需旋光拆分。发酵法的菌种为产谷氨酸微球菌，产氨短杆菌，大肠杆菌，产气气杆菌。工业发酵中获得高产的菌种，对于L-缬氨酸的发酵生产来说是至关重要的，是整个L-缬氨酸发酵工业的核心，是决定发酵产品工业价值的重要因素。

随着L-缬氨酸的市场需求不断增加，选育高产、稳定的生产菌种，促进L-缬氨酸在微生物体内的积累，进一步提高L-缬氨酸的产量一直是L-缬氨酸发酵工业技术开发和发酵工程化研究的热点，并且也将一直伴随L-缬氨酸发酵工业的发展，对于促进L-缬氨酸产业化的进程具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高L-缬氨酸的产量。所要解决的技术问题不限于如所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了蛋白质，名称为蛋白质CEY17_RS00300^V184M所述蛋白质可为下述任一种：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.4的蛋白质；

A2)将SEQ ID No.4所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

A3)在A1)或A2)的N端和/或C端连接标签得到的具有相同功能的融合蛋白质。

本发明还提供了核酸分子，所述核酸分子可为下述任一种：

B1)编码所述蛋白质CEY17_RS00300^V184M的核酸分子；

B2)编码序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子；

B3)核苷酸序列是SEQ ID No.3所示的DNA分子。

SEQ ID No.3所示的DNA分子即为本发明所述CEY17_RS00300^G550A基因。