[发明专利]叶酸和维生素B12联合检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，包括检测卡、标准曲线对照表、样本处理液，所述检测卡包括卡壳、设置在卡壳中的测试条，所述测试条包括底板、依次粘附在底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫；

所述结合垫上包被有量子点标记的叶酸抗体和量子点标记的维生素B12抗体的混合物，所述硝酸纤维素膜采用纳米微球标记叶酸抗原和维生素B12抗原的方式实现两种蛋白的同时检测；所述标准曲线对照表设置在条形码或SD卡上，条形码印在卡壳的表面。

2.根据权利要求1所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上依次设置有T1检测线、T2检测线、质控线，T1检测线上包被有纳米微球-叶酸抗原、T2检测线上包被有纳米微球-维生素B12抗原，质控线上包被有纳米微球-兔抗鼠IgG。

3.根据权利要求2所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述T1检测线和T2检测线、T2检测线和质控线之间的间隔不小于4mm。

4.根据权利要求1或2所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述纳米微球为粒径100nm—200nm、无荧光的带有功能团的微球。

5.根据权利要求1所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述量子点标记的叶酸抗体和量子点标记的维生素B12抗体的混合物的质量比为4：3。

6.根据权利要求1或5所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述量子点为不同粒径的硒化镉或硫化锌量子点。

7.根据权利要求1所述的叶酸和维生素B12联合检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫与结合垫为玻璃纤维膜。

8.一种叶酸和维生素B12联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备结合垫：

首先制备叶酸单克隆抗体量子点标记液和维生素B12单克隆抗体量子点标记液，于4℃，12000g-17000g下高速离心纯化，弃去上清，得到沉淀1和沉淀2；然后将复溶后的沉淀1和沉淀2按照比例1：1-1：5混合，最后将上述混合液按照5-20μl/cm的参数直接喷涂于玻璃纤维膜上，完全干燥后得到量子点结合垫；

(2)硝酸纤维素膜包被：

首先分别制备纳米微球-叶酸标记液、纳米微球-维生素B12标记液、纳米微球-兔抗鼠IgG标记液，分别于4℃，12000g-17000g下高速离心纯化，弃去上清，得到沉淀，用含有缓冲液和糖类物质的保存液将沉淀复溶至0.5ml；其次将硝酸纤维素膜粘贴在底板上，并对贴膜后的底板进行抗体包被，T1线包被纳米微球-叶酸，T2线包被纳米微球-维生素B12，C线包被纳米微球-兔抗鼠IgG，C、T线按照包被量为1μl/cm进行划线，烘干后，得到包被的划线胶板；

(3)制备样品垫：

配制10-100mM的Tris-Hcl缓冲液，pH为8.0-9.0，其中PVP的质量分数为0.1％-1％、Tween20的质量分数为0.1％-2％、酪蛋白钠的质量分数为0.05％-0.5％，用上述缓冲液浸泡玻璃纤维膜，烘干后即为样品垫；

(4)组装：

将处理过的吸水垫、结合垫及样品垫依次粘贴在包被完成的硝酸纤维素膜及胶板上，然后斩切成试剂条；

(5)试剂盒包装：

将试剂条装入卡壳中与干燥剂一起放入铝箔袋，用热封机密封铝箔袋。