[发明专利]一种基于免疫增强剂芸苔素内酯的灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种基于免疫增强剂芸苔素内酯的灭活疫苗及其制备方法和应用，涉及免疫佐剂技术及生物制药领域，免疫增强剂含有1‑1000μg/ml的芸苔素内酯(BR)，制备方法如下：将该免疫增强剂与灭活抗原、吐温‑80混合，制备成水相溶液；将油剂、司班和硬脂酸铝混合，得到油相溶液；将油相溶液与水相溶液混合，即可得到灭活疫苗，该发明中所包含的免疫增强剂与疫苗中的其他组分之间具有正向导向性，芸苔素内酯可以作为免疫佐剂使用且具有制备简单、成本低、不良反应小、疫苗免疫效果好等优点，特别是作为畜禽疫苗的佐剂，在肉类食品中没有有害物质残留，更有利于保证肉类食品的安全，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种灭活疫苗及其制备方法和应用，更具体一点说，涉及一种基于免疫增强剂芸苔素内酯的灭活疫苗及其制备方法和应用，属于免疫佐剂技术领域。

背景技术

随着人民生活水平的提高，国内家禽养殖量日益增多，疫病防控也越来越需要得到重视。尤其是常见的新城疫和高致病性禽流感的时有爆发，急需便宜有效、可大规模应用的灭活疫苗。目前常用动物疫苗主要有：(1)弱毒疫苗；(2)灭活疫苗；(3)代谢产物疫苗；(4)亚单位疫苗；(5)活载体疫苗；(6)基因缺失苗。而油乳剂灭活疫苗是其中综合因素考虑下最适合生产使用的疫苗种类。疫苗的生产会受到诸多因素的影响，例如生产用抗原效价的稳定，不同生产批次的差异，制备过程的复杂程度和精细程度，因各原料的成本高低而做的取舍。高品质的疫苗需要有高效的佐剂配合才能达到很好的免疫效果，所以能稳定生产又高效的佐剂配方尤为重要。本专利提出了芸苔素内酯作为增强剂主要成分，其获取简单，质量稳定，免疫效果好。

佐剂是一类非特异性免疫刺激剂，其主要作用是配合疫苗抗原使用，主要功能有增强疫苗抗原的免疫原性；促进细胞免疫和体液免疫，优化免疫应答；增进抗原与黏膜之间的传递以及免疫接触；减少疫苗成分中抗原的需求量以及在实施过程中的免疫接种次数；优化抗原结构，维持抗原构象等。

佐剂最广泛的用途就是用来提高人和畜禽疫苗的抗体水平预防传染性疾病发生。将抗原与佐剂混合后，一起注射于动物体内可增强免疫系统对抗原的免疫抗性。目前常用的佐剂包括以下种类：(1)铝佐剂；(2)弗氏佐剂；(3)免疫刺激复合物；(4)细胞因子佐剂；(5)天然来源免疫佐剂；(6)微生物来源的佐剂；(7)其他种类的疫苗佐剂，例如脂质体、纳米粒子佐剂、粘膜免疫佐剂等。上述佐剂种类繁多，但其特性各不相同。例如，一些佐剂制备简单，但有一定的副作用缺陷，如铝盐佐剂和弗氏佐剂；某些佐剂的制备复杂且昂贵，如细胞因子佐剂和微生物佐剂；有些药物安全性高，可能需要改进，如天然免疫佐剂。

灭活疫苗尤其是病毒灭活疫苗因其抗原分子小、免疫原性不强，不能引起足够强的免疫应答，需要佐剂辅助刺激机体才能产生较强的免疫应答，矿物油佐剂加入疫苗制剂后能促进、增强或延长机体对抗原特异性免疫应答，效果远远优于水质佐剂，这也是口蹄疫灭活疫苗、禽流感灭活疫苗等一直使用油佐剂的原因所在。

新城疫(Newcastle disease,ND)是一种高致病性禽类病毒性传染性疾病。ND是全球家禽业的主要威胁。这种疾病在许多以农业为国民收入主要来源的国家流行，它是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)将其列为A类疫病。新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)可经消化道、呼吸道，也可经眼结膜、受伤的皮肤和泄殖腔黏膜侵入机体。NDV的破坏性影响可以通过使用疫苗来限制。目前，研究重点是改进诊断方法和更好的疫苗开发。由于减毒活疫苗、灭活疫苗以及正在兴起的亚单位疫苗均未能有效遏制多种全球主要病原体的威胁。如众所周知的灭活疫苗，由于其非复制性，它们非常安全，但通常免疫原性较差，不会引起持久的免疫力。因此，共同要求开发可能克服疫苗弱点的新型佐剂策略。