[发明专利]一种索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法在审
| 申请号： | 202111556110.2 | 申请日： | 2021-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN114457099A | 公开（公告）日： | 2022-05-10 |
| 发明（设计）人： | 陈本顺;李大伟;徐春涛;何伟;尹强;张维冰;邱磊;江涛;尹斌 | 申请（专利权）人： | 江苏阿尔法药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 张红艳 |
| 地址： | 223800 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 索马鲁肽 核心 生物 发酵 制备 方法 | ||
1.一种索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述核心肽链为Lys26Arg34GLP-1(9-37)、Lys26Arg34GLP-1(10-37)或Lys26Arg34GLP-1(11-37)；
具体方法为，通过将核心肽链与融合蛋白所需的内切酶或其突变体耦联获得融合蛋白DNA序列，然后构建融合蛋白的表达载体，载入表达细胞，融合蛋白表达后获得包涵体，复性纯化后酶切获得产物。
2.根据权利要求1所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述融合蛋白DNA序列的结构为以下任一种：(1)6xHis-TEVp突变体-TEV site-核心肽链；(2)TEVsite-核心肽链-TEV site-6xHis-TEVp；(3)TEV site-核心肽链-TEV site-6xHis-TEVp突变体。
3.根据权利要求2所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述融合蛋白DNA序列为SEQ ID NO：1-3所示。
4.根据权利要求3所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述融合蛋白的表达载体中操纵子为lac操纵子，并使用Km抗生素标记。
5.根据权利要求4所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述表达细胞为Escherichia coli。
6.根据权利要求5所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于：所述表达细胞为E.coli BL21(DE3)。
7.根据权利要求1-6任一所述的索马鲁肽核心肽链的生物发酵制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)合成编码基因，所述编码基因包含酶切位点序列和核心肽链序列，还包含TEVp突变体序列或TEVp序列；
2)构建融合蛋白的表达载体，并载入表达细胞，表达细胞为大肠埃希菌；
3)确定阳性菌后，通过发酵培养基进行大肠杆菌发酵，促进融合蛋白的表达；
4)通过超声波破碎或高压匀浆仪等破碎细胞方法获得包涵体，并进行包涵体的洗涤和变性；
5)融合蛋白复性同时进行自酶切反应，将获得的混合多肽进行分离纯化获得所需索马鲁肽核心肽链样品。
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