[发明专利]BHK-21细胞克隆株及利用BHK-21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法

说明书

本发明涉及病毒培养技术领域，具体涉及BHK‑21细胞克隆株及利用BHK‑21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法。本发明提供BHK‑21细胞克隆株QYHZZ‑BHK‑21，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021133。该BHK‑21细胞克隆株能够在全悬浮无血清培养过程中快速增殖，保持较高的细胞活率，在接种新城疫病毒后，能够使得病毒快速繁殖，在较短时间内获得较高的病毒HA效价，制备得到的新城疫病毒抗原的质量较好，具有较高的免疫原性和安全性。本发明提供的全悬浮无血清培养方法适用于新城疫病毒及其疫苗的规模化生产，为细胞源疫苗的生产提供了技术基础。

技术领域

本发明涉及病毒培养技术领域，具体涉及一株BHK-21细胞克隆株及利用BHK-21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法。

背景技术

目前，禽用疫苗的生产仍主要依靠传统的鸡胚法(中国兽药典)工艺实现。鸡胚法最初于20世纪50年代开发，虽然已在产量、自动化、容量、质量保证和生产速度等方面已有较大进度，但是，鸡胚仍然存在外源病毒污染的风险和母源抗体的干扰。因此，亟需高效的病毒培养方法替代鸡胚法。

全悬浮培养方法可以解决鸡胚法制备病毒的上述问题，并降低病毒制备的生产成本，而且，全悬浮培养工艺易于逐级放大、操作简单、自动化程度高，获得的病毒效价和疫苗质量比较均一、更容易实现规模化、产业化生产。目前，BHK-21全悬浮细胞已成功在口蹄疫疫苗生产中应用，不仅缩短了疫苗生产周期，降低劳动强度和生产成本，还减少了批间差异，提高了疫苗质量。但关于新城疫病毒，尚未有成熟的全悬浮培养细胞和培养方法。

发明内容

本发明的目的是提供一株BHK-21细胞克隆株及利用BHK-21细胞克隆株全悬浮培养新城疫病毒的方法。

在采用全悬浮培养技术培养病毒时，全悬浮细胞的性能以及全悬浮细胞与病毒之间的适应性是影响病毒增殖速度、产量和病毒抗原质量的关键因素，此外，大规模生物反应器与摇瓶或小体积生物反应器的培养环境和条件不同，很多全悬浮细胞虽然能够在小规模培养时表现较好的病毒扩增性能，但是，在大规模生物反应器中的生长等性能明显降低，无法适用于病毒的规模化生产。因此，本发明首先对幼地鼠肾细胞BHK-21细胞进行驯化，获得了适应新城疫病毒(尤其是NDV-La Sota株)的全悬浮BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21，该细胞克隆株能够在全悬浮无血清培养条件下快速繁殖，在接种新城疫病毒后，能够在较短时间内快速获得较高的病毒效价，制备的新城疫病毒抗原具有良好的免疫原性和安全性，QYHZZ-BHK-21克隆株尤其能够在大规模生物反应器中快速扩增病毒，适于新城疫病毒的规模化生产。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21，该细胞株已于2021年12月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉，武汉大学，邮编430072)，分类命名为悬浮的幼地鼠肾细胞QYHZZ-BHK-21，保藏编号为CCTCC NO：C2021133。

基于BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21的特性，本发明提供所述BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21在病毒的全悬浮培养中的应用。

优选地，所述全悬浮培养为全悬浮无血清培养。

本发明还提供所述BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21在病毒疫苗制备中的应用。

以上所述的病毒为BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21敏感的动物病毒。优选为新城疫病毒。更优选为新城疫病毒La Sota株。

进一步地，本发明提供一种新城疫病毒的全悬浮无血清培养方法，所述方法包括：将所述BHK-21细胞克隆株QYHZZ-BHK-21接种于全悬浮无血清培养基中，再接种新城疫病毒进行全悬浮无血清培养，获得病毒液。