[发明专利]抗人CD19与CD206双特异性抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗人CD19与CD206双特异性抗体及其制备方法和应用，该抗体包括特异性结合CD19的表位的第一多肽链以及特异性结合CD206的表位的第二多肽链和第三多肽链；第二多肽链分别与第一多肽链、第三多肽链彼此共价结合。本发明的抗体能够在体内与体外同时靶向人源CD20supgt;+/supgt;B淋巴细胞表面的CD19分子与CD163supgt;+/supgt;M2巨噬细胞表面的CD206分子，从而调节肿瘤微环境中CD20supgt;+/supgt;B细胞与CD163supgt;+/supgt;M2巨噬细胞之间的极性化距离，诱发CD20supgt;+/supgt;B细胞与CD163supgt;+/supgt;M2巨噬细胞共定位互作，促进肿瘤微环境中CD163supgt;+/supgt;M2巨噬细胞，在CD20supgt;+/supgt;B淋巴细胞分泌的TNF或者IFN‑γ诱导下，极性分化为CD86supgt;+/supgt;M1巨噬细胞，介导肿瘤抑制与杀伤。

技术领域

本申请涉及分子生物学技术领域，具体而言，涉及一种抗CD19与CD206受体胞外段的人源化IgG1型双特异性抗体及其制备方法和应用。

背景技术

目前在肿瘤相关巨噬细胞(TAM)方面的研究中，目前已经达成的共识为TAM，通常分为两种功能亚型，即经典活化的CD86⁺M1巨噬细胞和选择性活化的CD163⁺M2巨噬细胞。前者通常发挥抗肿瘤功能，包括直接介导细胞毒性和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)以杀死肿瘤细胞；后者可促进肿瘤细胞的发生和转移，抑制CD8⁺T细胞介导的抗肿瘤免疫反应，促进肿瘤血管生成，导致肿瘤进展。CD86⁺M1和CD163⁺M2巨噬细胞都具有高度的可塑性，因此可以在肿瘤微环境变化或治疗干预时相互转化。

目前针对于CD163⁺M2巨噬细胞与CD20⁺B淋巴细胞之间直接互作的机制研究尚且缺乏，但是CD86⁺M1细胞极性化反应的发生，需要IFN-γ和TNF-α的诱导。CD20⁺B淋巴细胞识别肿瘤抗原活化后，会分化为TNF或者IFN-γ分泌型CD20⁺B细胞。所以，如果能够在肿瘤微环境中实现CD163⁺M2巨噬细胞与CD20⁺B淋巴细胞的共定位分布或者近距离分布，将有助于CD163⁺M2巨噬细胞，在CD20⁺B淋巴细胞分泌的TNF或者IFN-γ诱导下，极性分化为CD86⁺M1巨噬细胞，实现肿瘤微环境的重塑，促进CD86⁺M1巨噬细胞介导的多元化抗肿瘤效应，达到肿瘤抑制或杀伤的治疗效果。

发明内容

本发明提供了一种抗人CD19与CD206双特异性抗体(下称anti-CD19/CD206)，可同时特异性识别CD20⁺B细胞表面的特异性辅助受体分子CD19受体分子胞外段，以及CD163⁺M2巨噬细胞表面的特异性受体分子CD206胞外段，实现体外条件下，或者体内实体瘤微环境中CD20⁺B细胞与CD163⁺M2巨噬细胞的共定位互作触发，以及极性化分布距离的调节。

本发明的抗人CD19与CD206双特异性抗体，包括特异性结合CD19的表位的第一多肽链以及特异性结合CD206的表位的第二多肽链和第三多肽链；所述第二多肽链分别与所述第一多肽链、第三多肽链彼此共价结合，其中：

(1)所述第一多肽链依次包括Anti-CD19信号肽、Anti-CD19-scFv(VH)、Anti-CD19-scFv(VL)，Anti-CD19-CH2和Anti-CD19-CH3，其中Anti-CD19-scFv(VH)与Anti-CD19-scFv(VL)彼此通过肽接头连接；