[发明专利]甲状腺激素干扰物的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种甲状腺激素干扰物的检测方法及检测试剂盒，包括以下步骤：将酵母固定于培养基的表面，所述酵母含有甲状腺激素受体基因、共激活因子基因和报道基因；添加待测样本至所述培养基的表面与所述酵母进行作用；将与待测样本作用后的所述酵母进行细胞壁破碎；检测所述酵母中报道基因的表达水平。本发明建立的固定化酵母环境甲状腺激素干扰效应检测方法可直接将密度较高的酵母细胞固定覆盖在培养基表面，90天的保存期内，只需直接加入环境样本，就可以开展样品测试，无需水样前处理，无需酵母细胞临时预培养，大大降低了检测条件要求，能够适用于野外的现场检测。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别是涉及一种甲状腺激素干扰物的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

现阶段开展环境水样环境甲状腺激素干扰物(TDCs)的检测，多以异位检测为主，根据TDCs的理化特性开展定性、定量的仪器检测。通常需要采集环境水样，运送回实验室，经过前处理后，开展分析测试，可见现阶段环境水样TDCs的检测通常较为繁复且费时费力，最重要的是上述方法无法直接给出环境水样甲状腺激素干扰效应的信息，无法直接判断样品的甲状腺激素干扰毒性。

与上述仪器检测方法相比，生物测试方法由于具有效率高速率快、经济等优点，成为环境水样甲状腺激素干扰效应检测的重要技术类型。例如重组TR基因酵母法，其通过将TR和共激活因子的DNA片段分别整合到质粒中，通过生物技术将质粒转染酵母细胞，构建重组TR基因酵母。当酵母细胞暴露到环境水样中，水样TDCs与细胞内的TR作用，激活报道基因LacZ转录产生β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase，β-Gal)，通过检测β-Gal活性大小就可以定量表征环境水样的甲状腺激素干扰效应。由于重组TR基因酵母法具有操作简单、反应迅速、方法灵敏等优点成为目前常用的环境水样甲状腺激素干扰效应检测方法。

但是，传统的重组TR基因酵母法在水环境领域的应用，通常需要结合复杂的样品前处理流程，如水样的富集、净化、浓缩等，极大的削弱了方法在时间、效率方面的优势。此外，传统的方法需要对酵母细胞进行培养，其无菌操作的要求严重制约了该方法在野外的现场应用，因此亟待对方法进行改进以满足现成快速、高效检测的需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种样品处理流程简单、检测条件要求较低的甲状腺激素干扰物的检测方法。

一种甲状腺激素干扰物的检测方法，包括以下步骤：

将酵母固定于培养基的表面，所述酵母含有甲状腺激素受体基因、共激活因子基因和报道基因；

添加待测样本至所述培养基的表面与所述酵母进行作用；

将与待测样本作用后的所述酵母进行细胞壁破碎；

检测所述酵母中报道基因的表达水平，所述报道基因的表达水平越高表示所述待测样本中甲状腺激素干扰物的浓度越高。

本发明采用表面固定法将重组TR(甲状腺激素受体)基因酵母固定化，保持酵母特有的生理活性，进而用于与待测样本作用，然后破碎细胞壁并通过检测报道基因的表达水平确定待测样本中甲状腺激素干扰物的浓度。本发明建立的固定化酵母环境甲状腺激素干扰效应检测方法可直接将密度较高的酵母细胞固定覆盖在培养基表面，90天的保存期内，只需直接加入环境样本，就可以开展样品测试，无需水样前处理，无需酵母细胞临时预培养，大大降低了检测条件要求，能够适用于野外的现场检测。测试结果显示该方法保持了酵母细胞活性，新方法体系稳定，结果与现有方法具有可比较性。

在其中一个实施例中，所述培养基为海藻酸钠培养基或聚乙烯醇培养基。

在其中一个实施例中，所述海藻酸钠培养基中海藻酸钠的质量浓度为0.01g/mL～0.03g/mL，所述聚乙烯醇培养基中聚乙烯醇的质量浓度为0.005g/mL～0.015g/mL。