[发明专利]甲状腺激素干扰物的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.一种甲状腺激素干扰物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将酵母固定于培养基的表面，所述酵母含有甲状腺激素受体基因、共激活因子基因和报道基因；

添加待测样本至所述培养基的表面与所述酵母进行作用；

将与待测样本作用后的所述酵母进行细胞壁破碎；

检测所述酵母中报道基因的表达水平，所述报道基因的表达水平越高表示所述待测样本中甲状腺激素干扰物的浓度越高。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述培养基为海藻酸钠培养基或聚乙烯醇培养基。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述海藻酸钠培养基中海藻酸钠的质量浓度为0.01g/mL～0.03g/mL，所述聚乙烯醇培养基中聚乙烯醇的质量浓度为0.005g/mL～0.015g/mL。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述将酵母固定于培养基的表面包括以下步骤：配制OD₆₀₀为0.65～2的酵母菌液，离心去上清后加入20～40μL培养液混合，然后接种于所述培养基的表面。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用裂解液对所述酵母进行细胞壁破碎，所述裂解液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、聚乙二醇辛基苯基醚、脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、原钒酸钠、氟化钠和乙二胺四乙酸。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述报道基因为β-半乳糖苷酶基因，通过检测β-半乳糖苷酶的活性检测所述报道基因的表达水平。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述检测β-半乳糖苷酶的活性包括以下步骤：将2-硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷与经所述细胞壁破碎的酵母混合开始酶反应，反应后加入Na₂CO₃溶液终止酶反应，取上清测定OD值，根据OD值计算β-半乳糖苷酶的活性。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述酶反应的时间为1.5～2.5小时。

9.根据权利要求1～8任一项所述的检测方法，其特征在于，所述待测样本的体积为400μL～600μL。

10.一种甲状腺激素干扰物的检测试剂盒，其特征在于，包括酵母固定化产物、细胞壁破碎试剂和报道基因检测试剂；所述酵母固定化产物通过将酵母固定于培养基的表面得到，所述酵母含有甲状腺激素受体基因、共激活因子基因和报道基因。