[发明专利]一种甲状腺激素混合抗原的抗体筛选方法

说明书

本发明公开了一种混合抗原的抗体筛选方法，包括以下步骤：S1：饲养及处理：饲养的小鼠观察无异样后，取小鼠阴性血清保存备用；S2：免疫：对所述步骤S1中分组的小鼠，分别于第1d、14d、28d、42d各注射抗原一次；S3：抗血清的分离与保存：每次免疫抗原后的第7天，小鼠断尾采集血样，收集血清，备用；S4：抗体筛选。筛选得到针对多种抗原的抗体，通过评价混合免疫制备的抗体与单一抗原免疫制备的抗体效价来探讨一次反应同时检测多种抗原的可能性，可达到提高检测效率和节约检测成本的目的；对小鼠进行混合抗原免疫，缩短了免疫时间，提高了免疫效率，同时与单一抗原免疫得到的抗体在性质上没有显著区别。

技术领域

本发明涉及抗体制备技术领域，具体涉及一种甲状腺激素混合抗原的抗体筛选方法。

背景技术

传统单克隆抗体制备过程中,在抗原免疫时,采用一只小鼠一次免疫一种抗原制备得到这种抗原的单克隆抗体,成本高、产量低、制备程序繁杂、周期长。

为此,在单克隆抗体制备过程中,改变传统的对小鼠一次免疫一种抗原的单一免疫方法,将多种抗原同时混合免疫一只小鼠后，再用传统方法筛选制备能同时针对多种抗原的共同决定簇的单克隆抗体，能够实现一次反应检测多种抗原。

混合免疫由于一次对小鼠免疫多个抗原,筛选针对多个不同抗原的单克隆抗体,因此，一次反应能同时检测多种抗原，将大大减少分析中的工作量。近年来,成为通量化抗体制备研究的热点之一。

采用混合免疫方法制备针对不同甲状腺激素的抗体国内外有少量报道,但缺乏关于其在性质上与单一抗原免疫抗体的对比研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种混合抗原的抗体筛选方法，能够对小鼠进行免疫，缩短了免疫时间，提高了免疫效率，同时与单一抗原免疫得到的抗体在性质上没有显著区别。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，该混合抗原的抗体筛选方法，包括以下步骤：

S1：饲养及处理：饲养的小鼠观察无异样后，取小鼠阴性血清保存备用；

免疫前，将饲养的小鼠分成若干组并编号；第一组小鼠注射的免疫抗原为不同抗原的等量混合物；其余各组小鼠注射的为各不相同的单一免疫抗原，免疫剂量与第一组中对应的相同的免疫抗原相同；

S2：免疫：

对所述步骤S1中分组的小鼠，分别于第1d、14d、28d、42d各注射抗原一次；

S3：抗血清的分离与保存：

每次免疫抗原后的第7天，小鼠断尾采集血样，收集血清，备用；

S4：抗体筛选：

将所述步骤S3得到的血清按1:1000稀释，采用间接ELisa测定抗血清的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，取样的天数为横坐标，得到抗体产生进程曲线。

上述技术方案中，采用混合免疫方法进行免疫，筛选得到针对多种抗原的抗体，通过评价混合免疫制备的抗体与单一抗原免疫制备的抗体效价来探讨一次反应同时检测多种抗原的可能性，可达到提高检测效率和节约检测成本的目的；对小鼠进行免疫，缩短了免疫时间，提高了免疫效率，同时与单一抗原免疫得到的抗体在性质上没有显著区别。

优选的，在所述步骤S3中，于每次免疫抗原7d后，即第7d、21d、35d、49d断尾采血，获取血清。

优选的，在所述步骤S3中，采集到的血样在4℃放置2h，6000r/min离心10min，收集血清，并添加Proclin 300，分装，-20℃保存，备用。

优选的，在所述步骤S1中，阴性血清于-20℃保存备用；

饲养的小鼠为6周龄左右雌性小鼠，饲养一周。