[发明专利]一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用

说明书

本发明提供了一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用，属于家畜人工授精技术领域。本发明提供了一种兔精液冷冻保存稀释液，所述兔精液冷冻保存稀释液以水作为溶剂，所述兔精液冷冻保存稀释液中，每100mL水添加：三羟甲基氨基甲烷3～4g、柠檬酸1～2g、葡萄糖0.5～1g、海藻糖2～3g、L‑谷氨酸0.5～1g、二甲基亚砜10～20mL和甘油2～4mL；所述兔精液冷冻保存稀释液的pH值为6.5～7.5。本发明提供的兔精液冷冻保存稀释液明显提高了冷冻后精子的活率，质膜完整率和顶体完整率，有利于提高兔的繁殖效率和育种速度。

技术领域

本发明属于家畜人工授精技术领域，具体涉及一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用。

背景技术

家兔属于多胎动物，鲜精基本可以满足日常的人工授精需要。但是针对种公兔长距离运输，冷冻精液可以避免活体动物引种时需要进行检疫、隔离和种畜的饲养等问题。而且针对濒危品系和转基因品系进行精子冷冻要比胚胎保种更方便、更简单易行。同时用精液冷冻保存技术可以长时间保存优良品种种公兔的精液，达到有效缓解种质资源“卡脖子”带来的问题。公兔“夏季不育”的现象时有发生，精液的冷冻保存可以解决并且避免因其它原因造成公兔暂时精液质量不佳的问题，使得公母兔饲养比例降低，减少公兔饲养量，同时降低养殖场饲养成本，提高经济效益。

目前，猪、马、牛、羊等精液的冷冻稀释保存液研究较多，产品已完全商品化，但兔精液冷冻保存研究较少。目前市场上兔精液的冷冻保存稀释液的商品化产品几乎没有，且质量参次不齐，精子复苏后活力不高，很难有效开展人工授精生产繁殖工作。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种兔精液冷冻保存稀释液和制备方法、兔精液冷冻保存方法和应用。本发明提供的兔精液冷冻保存稀释液大大提高了冷冻后精子的活率，质膜完整率和顶体完整率，且质量稳定，有利于提高兔的繁殖效率和育种速度。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种兔精液冷冻保存稀释液，所述兔精液冷冻保存稀释液以水作为溶剂，所述兔精液冷冻保存稀释液中，每100mL水添加：三羟甲基氨基甲烷3～4g、柠檬酸1～2g、葡萄糖0.5～1g、海藻糖2～3g、L-谷氨酸0.5～1g、二甲基亚砜10～20mL和甘油2～4mL；所述兔精液冷冻保存稀释液的pH值为6.5～7.5。

优选的，所述兔精液冷冻保存稀释液中，每100mL水添加：三羟甲基氨基甲烷3.03g、柠檬酸1.69g、葡萄糖0.85g、海藻糖2.05g、L-谷氨酸0.74g、二甲基亚砜16mL和甘油3mL；所述兔精液冷冻保存稀释液的pH值为7.3。

本发明提供了上述技术方案中所述的兔精液冷冻保存稀释液的制备方法，包括以下步骤：将三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸、葡萄糖、海藻糖、L-谷氨酸、二甲基亚砜、甘油和水混合后制得。

本发明提供了上述技术方案中所述的兔精液冷冻保存稀释液或上述技术方案中所述的制备方法制备得到的兔精液冷冻保存稀释液的兔精液冷冻保存方法，包括如下步骤：将兔精液进行冷藏，得到冷藏后的兔精液；将所述冷藏后的兔精液与所述兔精液冷冻保存稀释液进行等温混合，得到混合液；将所述混合液进行平衡、液氮熏蒸后冷冻保存。

优选的，冷藏前，所述兔精液是去除了凝胶成分后的兔精液；所述兔精液的活率在0.8以上。

优选的，所述兔精液冷藏的温度为2～8℃，所述冷藏的时间为60～120min。

优选的，所述兔精液冷冻保存稀释液和冷藏后的兔精液的体积比≤5:1。

优选的，所述平衡的温度为2～8℃，所述平衡的时间为30～60min。

优选的，所述熏蒸为将平衡后得到的混合液在液氮液面上方的3～10cm进行熏蒸；所述熏蒸的时间为5～20min。