[发明专利]一种Eze-ECM水凝胶的制备方法

说明书

本发明公开了一种Eze‑ECM水凝胶的制备方法，具体包括如下步骤：A.准备工作；B.猪小肠预处理；C.脱细胞处理；D.凝胶化处理；E.制备Eze‑ECM水凝胶。本发明主要通过提供一种ECM水凝胶的制备方法，使ECM水凝胶能够符合Eze的负载结构，形成具有稳定三维结构的ECM水凝胶，后续能够形成直接注射治疗，相较于如今的脊髓内神经信号网络的重建治疗方案，如口服药和区域注射，本方法的脊髓腔更具有先进性和突破性，可进一步促进损伤区域的恢复。

技术领域

本发明涉及医疗药物制备工艺，特别涉及一种Eze-ECM水凝胶的制备方法。

背景技术

脊髓损伤后药物的使用具有局限性。一方面，口服药物不易透过血-脊髓屏障，且具有存留时间过短、代谢速率过快的缺点，导致其在应用时出现瓶颈；另一方面，传统局部注射药物无法在脊髓损伤指定部位释放。因此，新型载药方式的研究，对于脊髓损伤后的神经再生与功能修复至关重要。

依折麦布(Eze)是一种新型的选择性胆固醇吸收抑制剂，可通过抑制NPC1L1降低胆固醇水平而改善高血脂症，据报道，Eze与辛伐他汀联用能够改善大鼠脊髓损伤后的神经功能，减轻内皮细胞炎症反应，其它相关研究和论文也说明了，Eze能够显著降低脊髓损伤急性期细胞凋亡，促进神经元损伤的修复，改善脊髓损伤后大鼠的运动功能恢复。

在现有技术中，由于ECM具有强大的促进再生的能力，在中枢神经系统的发育、成熟以及损伤修复的过程中起着重要的调控作用，从而在结合Eze和ECM后即可得到具有强修复作用的Eze-ECM水凝胶，然而结合过程中依旧需要具有稳定三维结构的ECM水凝胶并在此基础上负载Eze，否则无法达到最佳的治疗效果，因此制备合格的Eze-ECM水凝胶是如今脊髓损伤后药物的使用趋势。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种Eze-ECM水凝胶的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

本发明一种Eze-ECM水凝胶的制备方法，具体包括如下步骤：

A.准备工作，将刮肠机和操作台杀菌消毒，猪小肠放置于恒温箱保存，将0.1％的过氧乙酸溶液，PBS缓冲液，0.1M盐酸-胃蛋白酶液，0.1M氢氧化钠均放置于阴凉处存放；

B.猪小肠预处理，以猪小肠为原料，通过刮肠机刮去猪小肠的浆膜层、肌层和粘膜层，留置小肠粘膜下层及粘膜固有层；

C.脱细胞处理，将步骤B中留置的小肠粘膜下层及粘膜固有层均放置于0.1％的过氧乙酸溶液中浸泡1.5～2.5h，并采用PBS缓冲液清洗沥干水分，随后放置于低温箱中低温冷冻干燥，初步获得ECM粉末；

D.凝胶化处理，将步骤C中ECM粉末溶解于0.1M盐酸-胃蛋白酶液中，在室温状态下搅拌消化46h～50h，采用0.1M氢氧化钠滴定溶液至PH7.2～7.6，之后在37℃恒温箱中放置0.8～1.2h，获得可注射的ECM水凝胶；

E.制备Eze-ECM水凝胶，称取一定量的Eze，将其放入至药品磨粉机中磨粉，称取一定量的Eze加入ECM水凝胶溶液中，低温搅拌至溶解，最后置于4℃下静置24h，获得Eze-ECM水凝胶。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤C中，放置于0.1％的过氧乙酸溶液中浸泡时间为2h，所述0.1％的过氧乙酸溶液液面没出浸泡物5cm。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤D中，在室温状态下搅拌消化时间为48h，所述氢氧化钠滴定溶液的PH值为7.4，所述37℃恒温箱中放置时间为1h。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤E中，Eze-ECM水凝胶的配比调制结果为含10mg/mlEze的10％(w/v)ECM水凝胶。