[发明专利]用于皮肤抗衰老间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及产品和应用

说明书

本发明公开了一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及其产品和应用，脐带来源的间充质干细胞的培养:正常进行细胞培养、消化、传代；脐带来源的间充质干细胞外泌体的获取:收集脐带来源的间充质干细胞培养液上清，进行离心和超滤浓缩，得干细胞外泌体；抗氧化剂的混合：脐带来源的间充质干细胞外泌体与抗氧化剂物理混合。本发明所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物中含有脐带来源的间充质干细胞外泌体和抗氧化剂，具有降低细胞内活性氧含量，促进细胞增殖及抗细胞衰老的作用，可在抗衰老方向的化妆品中应用。

技术领域

本发明涉及一种脐带来源的间充质干细胞外泌体及其用途，具体涉及一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞干细胞外泌体组合物的制备方法及其产品和应用。

背景技术

外泌体(Exosome)是由细胞内囊泡结构释放到细胞外的一种膜性囊泡，直径约40—160nm(平均直径为100nm)。由于质膜和多囊泡体之间融合的结果，外泌体样囊泡通过胞吐作用被分泌到胞外空间。外泌体样囊泡被脂质双层分为内部和外部，可以包含细胞的许多成分，包括DNA、RNA、脂质、代谢物、细胞质和细胞表面蛋白。外泌体的主要功能是进行细胞间信息交流，一般是通过传递膜表面或腔内的生物分子来进行细胞间信号传递，从而调节细胞的正常生理功能。外泌体的组成成分均来源于细胞，避免了人工合成材料的使用带来的细胞毒性、生物相容性等问题。由于外泌体继承了细胞的磷脂、表面蛋白等物质，具有丰富的生理功能，可以提高有效成分如抗氧化剂的传递效率。

皮肤衰老是人体衰老固有的生理机制和外界风吹日晒、环境污染等损害共同作用的结果。皮肤衰老通常体现在皮肤弹性降低和皮肤皱纹的产生。据报道，胶原蛋白和弹性蛋白的减少将导致皮肤弹性降低和皮肤皱纹产生，胶原蛋白和弹性蛋白受胶原蛋白酶和弹性蛋白酶调控，胶原蛋白酶和弹性蛋白酶能够引起胶原蛋白和弹性蛋白降解，从而导致胶原蛋白和弹性蛋白减少，导致皱纹产生，皮肤弹性减低。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法。

本发明的再一目的在于：提供一种上述方法制备的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物产品。

本发明的又一目的在于：提供一种上述产品的应用。

本发明目的通过以下方案实现：一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，包括脐带来源的间充质干细胞的培养、外泌体提取、与抗氧化剂混合，包括以下步骤:

(1)脐带来源的间充质干细胞的培养:进行细胞培养、消化、传代；

(2)脐带来源的间充质干细胞外泌体的获取:收集脐带来源的间充质干细胞培养液上清，进行离心和超滤浓缩，得干细胞外泌体；

(3)抗氧化剂的混合：脐带来源的间充质干细胞外泌体与抗氧化剂按质量比为1:3～5:1物理混合，所述抗氧化剂包括花青素、白藜芦醇、维生素A、维生素C、维生素E、类胡萝卜素成分中的一种或几种。

在上述方案基础上，优选的，收集传代次数为10代以内的细胞。

优选的，选择2～10代细胞是由于低代数的原代细胞具有更好的细胞因子分泌功能。

将代次在2～10代内的脐带来源的间充质干细胞按照1×10⁵个/ml的密度进行正常培养，细胞融合度达到80％以上时，更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基，培养3～5d后收集细胞培养上清，即条件培养基。所述条件培养基在4℃，100～300g条件下离心5～10min，弃去沉淀杂质，收集上层液体，用2000g离心20min，收集上层液体，再通过超滤膜进行超滤浓缩，去除小分子，最后将所得液体用0 .22μm无菌过滤器过滤除菌，获得外泌体。

优选的，所述的超滤膜为100000NW CO超滤膜。

培养基不含动物源血清。