[发明专利]用于皮肤抗衰老间充质干细胞外泌体组合物的制备方法及产品和应用

权利要求书

1.一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:

(1)脐带来源的间充质干细胞的培养:进行细胞培养、消化、传代；

(2)脐带来源的间充质干细胞外泌体的获取:收集脐带来源的间充质干细胞培养液上清，进行离心和超滤浓缩，得干细胞外泌体；

(3)抗氧化剂的混合：脐带来源的间充质干细胞外泌体与抗氧化剂按质量比为1:3～5:1物理混合，所述抗氧化剂包括花青素、白藜芦醇、维生素A、维生素C、维生素E、类胡萝卜素成分中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，收集传代次数为10代以内的细胞。

3.根据权利要求1或2所述的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，将代次在2～10代内的脐带来源的间充质干细胞按照1×10⁵个/ml的密度进行正常培养，细胞融合度达到80％以上时，更换新鲜的不含抗生素的无血清培养基，培养3～5d后收集细胞培养上清，即条件培养基；所述条件培养基在4℃，100～300g条件下离心5～10min，弃去沉淀杂质，收集上层液体，用2000g离心20min，收集上层液体，再通过超滤膜进行超滤浓缩，去除小分子，最后将所得液体用0 .22μm无菌过滤器过滤除菌，获得外泌体。

4.根据权利要求3所述的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，培养基不含动物源血清。

5.根据权利要求3所述的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，超滤膜为100000NW CO超滤膜。

6.根据权利要求3或4或5任一项所述的用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的制备方法，其特征在于，

(1)细胞培养：将购自市场的P2脐带来源的间充质干细胞，按照1×10⁵个/ml的接种密度进行正常培养，传代次数控制在P10以内，直至收集到足够的细胞，收集培养液上清，所用培养基不含抗生素和动物源血清；

(2)外泌体获得：将收集获得的培养液上清在4℃，100g条件下离心5min，弃去沉淀杂质，收集上层液体，用2000g离心20min，收集上层液体，再通过100000NWCO超滤膜进行超滤浓缩，去除小分子，最后将所得液体用0 .22μm无菌过滤器过滤除菌，获得外泌体；

(3) 外泌体与抗氧化剂混合：

步骤（2）所得外泌体溶液，与花青素、白藜芦醇、维生素C抗氧化剂按质量比为1:1进行物理混合，所述的抗氧化剂为花青素、白藜芦醇、维生素C的质量比为4：1：1的混合物。

7.一种用于皮肤抗衰老的脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物，其特征在于根据权利要求1-6任一所述的方法制备得到，包含了脐带来源的间充质干细胞外泌体和抗氧化剂。

8.一种根据权利要求7所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的应用，用于制备包括水剂、乳剂、膏霜、凝胶或粉剂的皮肤抗衰老化妆品。

9.根据权利要求8所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的应用，其特征在于，所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物在化妆品中的含量为1～20％。

10.根据权利要求8或9所述脐带来源的间充质干细胞外泌体组合物的应用，其特征在于，使用方法为涂敷。