[发明专利]一种类蛇毒三肽的合成方法

说明书

本发明提供了一种类蛇毒三肽的合成方法，属于多肽制备方法技术领域，具体为：以Fmoc‑Dab(Boc)‑OH、苄胺、Boc‑β‑Ala‑OH和H‑Pro‑OMe·HCl为原料合成类蛇毒三肽粗品，然后利用高效液相色谱、阴离子交换色谱相结合的方法对类蛇毒三肽粗品进行纯化得到高纯类蛇毒三肽，合成工艺路线短，分离纯化效果高，所得高纯类蛇毒三肽纯度，收率高。

技术领域

本发明属于多肽制备方法技术领域，具体涉及一种类蛇毒三肽的合成方法。

背景技术

类蛇毒三肽(H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl)是一种模拟蛇毒毒素活性的小分子多肽，研究发现，类蛇毒三肽可通过松弛面部肌肉、减少肌肉收缩而达到平滑和祛皱的目的。目前欧美、韩国、泰国等国已经研发出含有类蛇毒三肽的化妆品，类蛇毒三肽作为化妆品新型的美容成分也越来越热门。

目前，常规合成类蛇毒三肽的方法大多为液相合成和固相合成，但是液相合成的方法步骤较多，比较繁琐，全部采用液相合成方法得到的类蛇毒三肽粗品的纯度不高，总产率也不高，后续纯化收率低；采用固相合成，纯化难度较大，收率也极低，采用固相合成或液相合成都不可避免各方法的局限性。因此开发工艺简便、成本较低、纯度高的类蛇毒三肽合成方法，对广泛使用于化妆品的类蛇毒三肽有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，提供一种方法简单、收率高、产品纯度高的类蛇毒三肽的合成方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种类蛇毒三肽的合成方法，包括下述步骤：

S1、合成H-Dab(Boc)-NHBzl：

在四氢呋喃中，Fmoc-Dab(Boc)-OH(Nα-芴甲氧羰基-Nγ-叔丁氧羰基-L-2,4-二氨基丁酸)、苄胺、NMM(N-甲基吗啡啉)、EDCI(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺)反应得到Fmoc-Dab(Boc)-NHBzl，然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H-Dab(Boc)-NHBzl；

S2、合成Boc-β-Ala-Pro-OH：

在四氢呋喃中，Boc-β-Ala-OH(N-叔丁氧羰基-β-丙氨酸)、H-Pro-OMe·HCl(L-脯氨酸甲酯盐酸盐)、NMM、HOBT(1-羟基苯并三唑)、EDCI反应得到Boc-β-Ala-Pro-OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc-β-Ala-Pro-OH；

S3、合成Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl：

在四氢呋喃中，Boc-β-Ala-Pro-OH、H-Dab(Boc)-NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl；

S4、合成类蛇毒三肽：

将Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基，得到类蛇毒三肽粗品；

S5、类蛇毒三肽粗品纯化：

类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱，得到高纯类蛇毒三肽；其中，

所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中，阴离子交换色谱所用填料为改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯(PGMA-TCA)色谱填料。