[发明专利]一种类蛇毒三肽的合成方法

权利要求书

1.一种类蛇毒三肽的合成方法，其特征在于，包括下述步骤：

S1、合成H-Dab(Boc)-NHBzl：

在四氢呋喃中，Fmoc-Dab(Boc)-OH、苄胺、NMM、EDCI反应得到Fmoc-Dab(Boc)-NHBzl，然后用包含哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，得到H-Dab(Boc)-NHBzl；

S2、合成Boc-β-Ala-Pro-OH：

在四氢呋喃中，Boc-β-Ala-OH、H-Pro-OMe·HCl、NMM、HOBT、EDCI反应得到Boc-β-Ala-Pro-OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc-β-Ala-Pro-OH；

S3、合成Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl：

在四氢呋喃中，Boc-β-Ala-Pro-OH、H-Dab(Boc)-NHBzl、HOBT、EDCI反应得到Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl；

S4、合成类蛇毒三肽：

将Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl用三氟乙酸水溶液脱除Boc保护基，得到类蛇毒三肽粗品；

S5、类蛇毒三肽粗品纯化：

类蛇毒三肽粗品经粗品处理、高效液相色谱、阴离子交换色谱，得到高纯类蛇毒三肽；其中，

所述类蛇毒三肽粗品纯化过程中，阴离子交换色谱所用填料为改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色谱填料；

所述改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色谱填料是以聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球为基质，利用芦竹碱对其进行接枝改性，在表面形成一层芦竹碱作为阴离子交换功能基团制成，具体包括下述步骤：

1)单分散聚苯乙烯微球种子与邻苯二甲酸二丁酯混合活化；

2)以甲基丙烯酸环氧丙酯为单体，三聚氰酸三烯丙酯为交联剂，乙醇水溶液为溶剂，加入活化后的单分散聚苯乙烯微球种子，在引发剂、稳定剂、乳化剂的作用下发生聚合反应制得聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球；

3)将聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球用甲苯水溶液中充分溶胀后，加入芦竹碱反应，抽滤，用水、丙酮和乙醇洗涤，干燥即得改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色谱填料。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤S1中，Fmoc-Dab(Boc)-OH、苄胺、NMM、EDCI的摩尔比为1:1.0～1.2:1.2～1.5:10～15；

步骤S2中，Boc-β-Ala-OH、H-Pro-Ome·HCl、NMM、HOBT、EDCI的摩尔比为1:0.9～1.2:0.9～1.2:1.0～1.2:1.0～1.2；

步骤S3中，HOBT、EDCI的添加摩尔量分别为Boc-β-Ala-Pro-OH摩尔量的0.1～0.14倍、10～12倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，粗品处理过程为：

将类蛇毒三肽粗品加入到含有少量三氟乙酸的双蒸水中，用3.0～0.45μm的滤膜过滤，得到类蛇毒三肽粗品水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，阴离子交换色谱过程中：

填料为改性聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯色谱填料，流动相为包含0.02～0.05vol%醋酸铵、0.5～2vol%醋酸的水溶液，流速为2～10mL/min，柱温为30～45℃，收集乙酸型类蛇毒三肽溶液，减压浓缩、冷冻干燥获得高纯类蛇毒三肽。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，聚甲基丙烯酸环氧丙酯、三聚氰酸三烯丙酯的质量比为1:0.15～0.3。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，聚甲基丙烯酸环氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯微球、芦竹碱的质量比为1:0.6～1。

7.权利要求1～6任一项所述所述方法制备得到的类蛇毒三肽在制备抗皱化妆品中的应用，其特征在于，所述类蛇毒三肽的添加量为0.01～3％；

所述抗皱化妆品中还添加有四己基癸醇抗坏血酸酯、白花前胡醇；

所述四己基癸醇抗坏血酸酯的添加量为类蛇毒三肽质量的0.3～0.5倍，白花前胡醇的添加量为类蛇毒三肽质量的0.02～0.04倍。