[发明专利]抗原蛋白冻干小球及其制备方法

说明书

本发明提供了一种抗原蛋白冻干小球，包括冻干保护溶液和抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白冻干小球由所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液的体积比例为5:1‑9:1，所述抗原蛋白冻干小球的形状为球体状结构，使得抗原蛋白冻干小球可与受试样本直接混合使用，避免了液态因取样偏差，导致的检测结果的偏差，而且抗原蛋白冻干小球呈小球形态，与管壁不粘连，可实现转移，尤其是多个不同抗原蛋白的混合使用时，可根据实际需求快速进行组合使用，同时小球形态更利于运输与保存。本发明还提供了一种抗原蛋白冻干小球的制备方法，制备工艺简单方便，且确保了制得球状的原蛋白冻干小球，提升了稳定性和保存寿命。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗原蛋白冻干小球及其制备方法。

背景技术

抗原，是指能够刺激机体产生免疫应答或特异性免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应或特异性反应的物质。

目前国内市场中抗原蛋白冻干产品以粉末状为主，制备成小球的较少。冻干成粉末状的抗原蛋白存在以下缺陷：(1)易黏连管壁，复溶时会出现复溶不完全，导致结果测试不准确；(2)多个抗原蛋白混合冻干成粉末状，冻干粉内，每个抗原蛋白的量差异较大，不便于试剂的检测。

公开号为CN111110638A的中国专利公开了一种偶联有蛋白的微球冻干制剂及其制备方法、保存方式，微球冻干制剂包括冻干保护剂和偶联有蛋白的微球；该专利产品采用偶联有抗体或者抗原的微球与冻干保护剂混合后冻干获得，其中，所述偶联有蛋白的微球中的蛋白为抗体或者抗原，例如将N端含有c-Myc标签的SOX2抗原蛋白(GenScript公司)与Luminex公司荧光编码的MagPlex磁性微球进行偶联，其制备工艺包括：(1)微球的活化，取出微球，涡旋震荡及超声20s，使微球充分混匀重悬后吸取适量体积微球混悬液于离心管中置于磁力分离器上30s-60s，移除上清加入500μL激活缓冲液(O.1M NaH₂P0₄，pH6.2)，涡旋震荡及超声重悬微球后置于磁力分离器上分离微球，重复次步骤1-2次，向清洗后的微球中加入480μL激活缓冲液，涡旋震荡及超声混匀后一次加入10μL NHS及10μL EDC，在旋转混合仪上300rpm室温避光孵育20-30min；(2)SOX2蛋白偶联至微球，将激活后的微球置于磁力分离器上分离60s，移除上清重复此步骤2次，取500μL稀释好的SOX2融合蛋白(用偶联缓冲液稀释至10μg/mL)加入活化的微球中，涡旋震荡及超声后置于旋转混合仪上300rpm避光室温孵育2h，置于磁力分离器上60s移除上清；(3)微球的清洗，向离心管中加入500μL的洗涤液(10mM PBS，0.05％吐温-20)，涡旋震荡及超声重悬上述偶联微球，置于磁力分离器上60s移除上清；(4)微球的封闭，向清洗后的微球中加入500μL的封闭缓冲液(10mMPBS，5％驴血清，0.03％Prolin300)涡旋震荡及超声，在旋转混合仪上300rpm室温避光孵育30min，置于磁力分离器上60s移除上清，加入500μL的洗涤液清洗后磁力分离器上移除洗涤液后即得。偶联有抗体或者抗原的微球冻干制剂的形态是粉末形式存在的，冻干后的样品易黏连在冻干品的容器内壁上，不能进行固态的转移。

因此，有必要提供一种新型的抗原蛋白冻干小球及其制备方法以解决现有技术中存在的上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗原蛋白冻干小球及其制备方法，以克服粉末制剂黏连管壁、复溶不完全、多抗原混合不均匀的缺陷。

为实现上述目的，本发明的所述抗原蛋白冻干小球，包括冻干保护溶液和抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白冻干小球由所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液混合后冻干获得，且所述冻干保护溶液与所述抗原蛋白溶液的体积比例为5:1-9:1。