[发明专利]一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法

说明书

本发明公开了一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，包括以下步骤：细胞培养、基因测序、筛选差异基因、指定差异基因、细胞转染、检测Th1免疫调控能力并对Th1免疫调控能力进行评估。本发明方法根据不同来源MSCs在Th1免疫调解抑制方面存在异质性，进一步探索评估自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节能力相关性，为利用间充质干细胞表达的自身蛋白检测细胞质量提供依据；在涉及免疫调控治疗疾病时，为通过检测自身蛋白表达量评估间充质干细胞免疫调节能力提供标准。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法。

背景技术

间充质基质细胞(Mesenchymal stromal cells，MSCs)，又常称为间充质干细胞，具有多向分化潜能和免疫调节能力，已被广泛用于治疗1型糖尿病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和克罗恩病等多种难治性疾病。近些年来，MSCs的研究取得了鼓舞人心的成果，其中一些从临床前阶段进入了临床阶段，一些基于MSCs的治疗产品获得了不同国家监管机构的上市批准。

MSCs可以来源于一系列组织，包括脐带、胎盘、脂肪组织、骨髓、牙龈和牙髓等。不同组织来源的MSCs具有基本的生物学特性：比如增殖能力；多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等多种细胞的能力；免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及分泌调节因子，抑制T细胞的增殖及亚群的分化，从而发挥免疫重建的功能；表达一些特定的表面标志物，异体移植排异较轻。但是来源于不同组织的MSCs具有不同的生物学特性，呈现明显的组织异质性。其中MSCs一个显著的功能特征是能够分泌免疫介质或直接与免疫细胞相互作用，发挥免疫调节作用。MSCs在体外可显著抑制CD4+T细胞的增殖，明显抑制其向Th1、Th17亚群分化，显著促进IL-2诱导的PBMC中Tregs亚群的分化。

专利CN202110285278.8公开了一种筛选优质人脐带间充质干细胞免疫调节能力干细胞量化标准，在干细胞治疗时，根据干细胞移植到体内的免疫调节能力需求，选择符合条件的干细胞，以提高治疗效果。但是，当该量化标准涉及到MSCs通过Th1免疫调节功能治疗相关疾病和临床转化细胞选择时，具有一定盲从性，无法进一步评估不同来源间充质干细胞免疫调节能力与其自身蛋白的相关性，也就无法识别可以辅助筛选优质细胞的自身蛋白。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，能够进一步评估自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节能力相关性，为利用间充质干细胞表达的自身蛋白检测间充质干细胞质量提供依据。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，包括以下步骤：

1)细胞培养：培养和扩增八种组织来源的MSCs，包括牙龈MSCs、脂肪MSCs、胎盘蜕膜MSCs、胎盘绒毛膜MSCs、胎盘羊膜MSCs、牙髓MSCs、骨髓MSCs和脐带MSCs，每种MSCs分别培养三株，均扩增至P5代；

2)基因测序：提取所述步骤1)每株MSCs P5代细胞样本的转录组基因并测序；

3)筛选差异基因：根据所述步骤2)的测序结果，筛选与MSCs的Th1免疫调控能力相关的差异基因；

4)指定差异基因：指定所述步骤3)筛选出的一种差异基因，其表达的自身蛋白待评估Th1免疫调节相关性，构建此指定差异基因的siRNA载体；

这里，后续步骤将进一步对指定差异基因表达的自身蛋白，与间充质干细胞Th1免疫调节能力相关性进行评估，为利用自身蛋白检测细胞质量提供依据。