[发明专利]一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法

权利要求书

1.一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)细胞培养：培养和扩增八种组织来源的MSCs，包括牙龈MSCs、脂肪MSCs、胎盘蜕膜MSCs、胎盘绒毛膜MSCs、胎盘羊膜MSCs、牙髓MSCs、骨髓MSCs和脐带MSCs，每种MSCs分别培养三株，均扩增至P5代；

2)基因测序：提取所述步骤1)每株MSCs P5代细胞样本的转录组基因并测序；

3)筛选差异基因：根据所述步骤2)的测序结果，筛选与MSCs的Th1免疫调控能力相关的差异基因；

4)指定差异基因：指定所述步骤3)筛选出的一种差异基因，其表达的自身蛋白待评估Th1免疫调节相关性，构建此指定差异基因的siRNA载体；

5)细胞转染：选取八种P5代MSCs中任意两种，使用所述步骤4)构建的差异基因的siRNA载体进行转染，干扰指定基因表达，设为转染组，另设转染对照组，同一条件下，分别进行细胞培养；

6)检测Th1免疫调控能力：对干扰后的转染组和转染对照组细胞进行淋巴细胞亚群Th1亚群流式分析，经软件分析，得到所述步骤5)两种MSCs转染组和转染对照组的Th1细胞比例，计算得到Th1抑制增殖比率，根据Th1抑制增殖比率，比较确定转染组和转染对照组Th1免疫抑制能力变化趋势。

2.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，所述步骤4)指定差异基因为TLR5，构建载体为TLR5-siRNA。

3.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，所述步骤5)选取的两种P5代MSCs分别为牙髓MSCs和脐带MSCs。

4.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，所述步骤6)软件为Flowjo。

5.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，所述步骤6)Th1的抑制增殖比率的计算方式为[(转染对照组的Th1细胞比例-转染组的Th1细胞比例)/转染对照组的Th1细胞比例]％。

6.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，还包括对Th1免疫调控能力进行评估的步骤，若所述步骤4)指定的差异基因表达的自身蛋白含量更高，则所述步骤6)转染组较转染对照组Th1免疫抑制能力更强；若所述步骤4)指定的差异基因表达的自身蛋白含量更少，则所述步骤6)转染组较转染对照组Th1免疫抑制能力更弱；所述自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节呈正相关性。

7.根据权利要求1所述的一种自身蛋白与间充质干细胞Th1免疫调节相关性的评估方法，其特征在于，所述步骤5)转染后收集细胞进行qPCR或Western Blotting验证。