[发明专利]一种用于检测神经丝轻链的试剂盒及其方法与应用

说明书

一种用于检测神经丝轻链的试剂盒及其方法与应用，试剂盒包含第二抗体，所述第二抗体用于特异性结合至待测抗原，所述第二抗体修饰有用于放大信号的标记物。第二抗体上的标记物用于放大信号，能够直接发光产生检测信号，直接发光反应时间短，从而极大地提高NF‑L的检测速度。在一实施例中，本发明采用化学发光法进行免疫分析，发光时间短，发光强度与待测样本中NF‑L的含量成正比，进而通过检测发光强度对待测样本中的NF‑L进行定量。因此，该试剂盒具有检测灵敏度高、特异性强，检测时间短，检测成本低，可自动化操作等优点。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于检测神经丝轻链的试剂盒及其方法与应用。

背景技术

免疫磁微粒分离技术是一项基于抗原-抗体特异性结合所开展的免疫学技术。它主要是靠标记在磁微粒表面的修饰基团，如氨基、羧基、甲苯磺酰基、链霉亲和素等基团，与标记抗体共价或非共价偶联，可用于结合特异性抗原，在全自动免疫化学发光分析仪中，进行对应抗原物质的分离。

神经丝是神经细胞主要的细胞骨架成分。对于保持轴突口径和形态的完整十分重要，影响着神经传输的速率和准确性。存在着三种不同的神经丝链，根据其大小而定义，分别为神经丝轻链(NF-L)、神经丝中链(NF-M)和神经丝重链(NF-H)。神经丝轻链组成了重链的骨架，重链聚集形成了神经丝纤维。NF-L是神经丝蛋白中最先表达的亚结构，分子量为68KD，NF-H则是最后表达的，分子量为205KD，两者的表达是独立的。由于直接的创伤或者缓慢的退化过程，受损的神经细胞内容物释放至周边的隔室，所以可以定量检测轴突蛋白。升高的神经丝轻链(NF-L)水平已发现在各类退行性疾病中，例如肌萎缩性(脊髓)侧索硬化、阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化和在动物模型中的慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎。

现有的研究表明血清中和脑脊液中可以检测到NF-L，但血清中NF-L含量远远低于脑脊液，市面上现有的可应用于临床的产品中，化学发光试剂盒ELISA试剂盒仅能用于脑脊液中NF-L含量的检测，如果要检测血清中的NF-L含量，需使用Quanterix的Simoa系列仪器，并使用配套的单分子免疫检测试剂盒，该方法学虽灵敏度高，但试剂耗材和仪器昂贵，给NF-L的推广使用带来困难，因而迫切需要一种可检测血清中NF-L含量的高灵敏度的方法。

发明内容

根据第一方面，在一实施例中，提供一种用于检测神经丝轻链的试剂盒，所述试剂盒包含第二抗体，所述第二抗体用于特异性结合至待测抗原，所述第二抗体修饰有用于放大信号的标记物。

根据第二方面，在一实施例中，提供一种用于检测神经丝轻链的方法，包括：

分离抗原步骤，包括将待测样本、偶联有第一抗体的载体混合，使得待测样本中的待测抗原结合至所述第一抗体，然后分离得到结合有待测抗原的载体-第一抗体复合物，所述待测抗原为神经丝轻链；

检测步骤，包括将修饰有用于放大信号的标记物的第二抗体、结合有待测抗原的载体-第一抗体复合物混合，然后加入激发试剂，检测发光信号，根据发光强度值计算得到待测样本中待测抗原的浓度。

根据第三方面，在一实施例中，提供第一方面所述试剂盒在制备神经丝轻链检测试剂中的应用。

依据上述实施例的用于检测神经丝轻链的试剂盒及其方法与应用，第二抗体上的标记物用于放大信号，能够直接发光产生检测信号，直接发光反应时间短，从而极大地提高NF-L的检测速度。

在一实施例中，本发明采用化学发光法进行免疫分析，发光时间短，发光强度与待测样本中NF-L的含量成正比，进而通过检测发光强度对待测样本中的NF-L进行定量。因此，该试剂盒具有检测灵敏度高、特异性强，检测时间短，检测成本低，可自动化操作等优点。

附图说明

图1为实施例1的NF-L第二抗体的标记过程示意图。

图2为实施例1的试剂盒中校准品建立的标准曲线。