[发明专利]一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法

说明书

本发明涉及一种不含蛋白的碱性磷酸酶‑抗体偶联物稀释液及其制备方法，按质量分数计，包括0.1～1％的缓冲体系、2～10％的水溶性盐、0.01～1％的尿囊素、0.1～2.1％的氨基酸、1～5％的糖类化合物、0～5％的醇类化合物、0.01～0.2％的防腐剂、0.01～0.5％的表面活性剂和0.001～0.01％的还原剂，不包含蛋白成分。本发明稀释液不添加蛋白成分，同时通过各组分配合，能够保持碱性磷酸酶‑抗体偶联物的稳定性，在3天42度震荡和7天37度静置环境下能够保持近100％的活性，至少为83％；在4度环境下静置一年，活性最高能保持95％以上，至少在72％。

技术领域

本发明涉及化学试剂领域，具体涉及一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法。

背景技术

碱性磷酸酶(ALP，EC 3.1.3.1)是血浆膜结合的糖蛋白，并在自然界中广泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位点中包括两个锌离子和一个镁离子，这三个位点的金属离子对于酶活性至关重要。碱性磷酸酶可以水解各种单磷酸酯，并释放无机磷酸盐。1,2-二氧杂环丁烷化合物AMPPD作为一种超灵敏的碱性磷酸酶底物，在碱性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体，自行分解后四元环断裂释放出大量能量，从而激发化学发光反应。因此磁珠-抗体偶联物与碱性磷酸酶-抗体偶联物在化学发光试剂盒中可作为固相捕获试剂和酶标试剂用于检测血清中的痕量抗原。

碱性磷酸酶-抗体偶联物作为一种偶联蛋白，其在稀释液中失活主要分为物理降解和化学降解。为了防止偶联物的聚集或吸附与固相表面的物理降解，以及脱酰胺和二硫键断裂等化学降解，通常会在稀释液中添加牛血清白蛋白(BSA)等蛋白物质。

对于单独的碱性磷酸酶，早于2002年8月18日申请的专利《稳定碱性磷酸的方法》(公开号CN1522298A)中采用混合糖类和白蛋白后冷冻干燥保存。关于碱性磷酸酶标记物,早于2009年12月31日由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司申请的专利《稳定碱性磷酸酶或其标记物的试剂和方法》(CN102115737A)，其中主要包含蛋白、镁离子、钙离子激活剂、锌离子、钠离子、糖类添加剂和醇类添加剂。在此基础上，专利《标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液》(CN102628863A)和《用于小分子抗原与碱性磷酸酶标记结合物的保存液及其制备方法》(CN109212180A)扩增了稀释液中添加剂的范围，包括金属离子、糖类化合物、醇类化合物、聚合物、表面活性剂、氨基酸、和蛋白质类化合物。专利《一种碱性磷酸酶抗原抗体专用稀释液》(CN108663511B)在稀释液中添加了自制的高分子亲水化合物和改性氨基酸。专利《碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用》(CN110540978A)在稀释液中添加了未知结构的两亲性多聚物。上述专利中均表示在稀释液中需要添加蛋白类的物质来防止碱性磷酸酶偶联物的聚集和吸附。

碱性磷酸酶-抗体偶联物作为一种试剂组分必须溶解于水溶液，并能够在水溶液中稳定于各种可能的极限环境下。同时，溶液中应尽量不包含其它可能影响免疫反应的蛋白成分，如牛血清白蛋白，酪蛋白，明胶。因为长期或极限环境储存后，添加的蛋白可能自身聚集或与碱性磷酸酶-抗体偶联物聚集，导致测定时出现非特异性反应，主要反映为空白值升高或异常的临床检测结果。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种不含蛋白的碱性磷酸酶-抗体偶联物稀释液及其制备方法，该稀释液不添加蛋白成分，同时通过各组分配合，能够保持碱性磷酸酶-抗体偶联物的稳定性。

为了达到上述目的，本发明稀释液的技术方案是：

按质量分数计，包括0.1～1％的缓冲体系、2～10％的水溶性盐、0.01～1％的尿囊素、0.1～2.1％的氨基酸、1～5％的糖类化合物、0～5％的醇类化合物、0.01～0.2％的防腐剂、0.01～0.5％的表面活性剂和0.001～0.01％的还原剂，不包含蛋白成分。