[发明专利]一种高效表达羊生长激素的方法

说明书

本发明公开了一种高效表达羊生长激素的方法。本发明提供了一种制备羊生长激素的方法，包括如下步骤：1)制备表达羊生长激素的重组载体；该重组载体含有Trx标签、凝血酶酶切位点和羊生长激素；2)将所述重组载体和表达分子伴侣的载体共同转入大肠杆菌中，得到表达羊生长激素融合蛋白的重组菌；3)诱导表达所述重组菌，得到带有Trx标签的羊生长激素；4)凝血酶酶切所述带有Trx标签的羊生长激素蛋白，即得到羊生长激素；本发明的方法显著提高生长激素的可溶性表达，通过改变表达条件，及与分子伴侣共表达，大大的提高了羊生长激素的可溶性表达。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种高效表达羊生长激素的方法。

背景技术

生长激素(growth hormone,GH)是由动物脑垂体前叶嗜酸性细胞合成、储存和分泌的一种蛋白质激素，其结构是一条约186-191个氨基酸构成的肽链,分子质量约21kDa-22kDa。生长激素不仅可以增加体重和身高,而且其参与机体糖、蛋白和脂质的代谢调节。动物的生长激素(如：牛)主要用来增加产奶量和瘦肉率,提高饲料转化率等。

关于生长激素的获得主要来自两个途径，第一个是直接从动物或者人的脑垂体中进行提取；第二个方法是通过基因工程的手段来获得。而第一种方法是很久之前科技相对落后时候的方法，当时人的生长激素含量只占到了脑垂体干重的4％-8％，按一般的情况来讲一个垂体可得到3-5mg的生长激素。到了20世纪70年代，随着科技尤其是基因工程技术的发展，通常使用第二种方法来制备大量的重组生长激素来代替天然的生长激素。1985年，美国FDA批准了由基因工程技术产生的重组人生长激素。

从上世纪末到本世纪初，科学家们通过不同的方法对绵羊的生长激素进行了表达纯化，主要是使用原核表达。但是表达量低下、表达包涵体一直无法很好的解决，且包涵体复性后其活性无法保证。而出现包涵体主要是由于菌株在表达过程中强度太大，无法保障其所合成的肽链进行正确的折贴，从而形成了无活性的包涵体。

因此，如何能够高效制备绵羊生长激素成为值得探索的问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种提高羊生长激素可溶性原核表达的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1)将重组载体和表达分子伴侣的载体共同转入大肠杆菌中，得到重组菌；

所述重组载体含有Trx标签和羊生长激素；

2)诱导表达所述重组菌，实现提高羊生长激素可溶性表达；

所述羊生长激素具体以绵羊生长激素为例，具体为如下任一种：

a)包括序列2第133-322位的氨基酸序列的蛋白；

b)在a)所示蛋白序列的末端带有标签的蛋白；

c)序列2第125-322位所示的蛋白；

d)与a)-c)中任一至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的蛋白。

上述诱导采用的诱导剂为IPTG。

上述提高羊生长激素可溶性原核表达体现在导入表达分子伴侣的载体制备重组菌比不导入表达分子伴侣的载体制备重组菌经过诱导后的羊生长激素可溶性表达量高。

本发明的另一个目的是提供一种制备羊生长激素的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1)制备表达羊生长激素的重组载体；

该重组载体含有Trx标签和羊生长激素；