[发明专利]一种高效表达羊生长激素的方法

权利要求书

1.一种提高羊生长激素可溶性原核表达的方法，包括如下步骤：

1)将重组载体和表达分子伴侣的载体共同转入大肠杆菌中，得到重组菌；

所述重组载体含有Trx标签和羊生长激素；

2)诱导表达所述重组菌，实现提高羊生长激素可溶性表达。

2.一种制备羊生长激素的方法，包括如下步骤：

1)将重组载体和表达分子伴侣的载体共同转入大肠杆菌中，得到重组菌；

所述重组载体含有Trx标签和羊生长激素；

2)诱导表达所述重组菌，得到带有Trx标签的羊生长激素；

3)去除所述带有Trx标签的羊生长激素中的Trx标签，即得到羊生长激素。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述重组载体为将含有羊生长激素编码基因的核酸分子插入到带有Trx标签的表达载体，得到载体；

或，所述含有羊生长激素编码基因的核酸分子包括限制酶识别位点、凝血酶酶切位点、纯化标签、羊生长激素编码基因和另一限制酶识别位点。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述限制酶识别位点和所述另一限制酶识别位点分别为MscI和BamHI；

或，所述纯化标签为His标签；

或，所述羊生长激素为如下任一种：

a)包括序列2第133-322位的氨基酸序列的蛋白；

b)在a)所示蛋白序列的末端带有标签的蛋白；

c)序列2第125-322位所示的蛋白；

d)与a)-c)中任一至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的蛋白；

或，所述含有羊生长激素编码基因的核酸分子为序列1。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：

所述带有Trx标签的表达载体源于pET-32a(+)；

或，所述带有Trx标签的表达载体为将Msc1和BamH1双酶切pET-32a(+)载体后得到的线性载体骨架。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述表达分子伴侣的载体为pGro7。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

所述诱导表达的条件为：0.025mM-1mM的IPTG、20℃-37℃诱导培养20小时。

8.根据权利要求3-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述去除带有Trx标签的羊生长激素中的Trx标签为凝血酶酶切所述带有Trx标签的羊生长激素；

或，所述酶切的条件为0-4℃酶切8分钟。

9.根据权利要求3-8中任一所述的方法，其特征在于：

所述方法还包括如下步骤：在所述凝血酶酶切前或后，对酶切前产物或酶切后产物分别利用所述纯化标签纯化。

10.权利要求3-9中任一中带有Trx标签的表达载体和表达分子伴侣的载体在提高羊生长激素可溶性表达中的应用；

或，权利要求3-9中任一中带有Trx标签的表达载体、表达分子伴侣的载体和凝血酶在制备羊生长激素或提高羊生长激素产量中的应用；

或，权利要求3-9中任一中的羊生长激素、带有Trx标签的表达载体、表达分子伴侣的载体和凝血酶在制备羊生长激素或提高羊生长激素产量中的应用；

或，权利要求3-9中任一中的羊生长激素、表达载体和表达分子伴侣的载体在制备表达羊生长激素的重组菌中的应用；

或，经过Msc1和BamH1双酶切后的pET-32a(+)载体和pGro7载体在提高羊生长激素可溶性表达中的应用；

或，经过Msc1和BamH1双酶切后的pET-32a(+)载体、pGro7载体和凝血酶在制备羊生长激素或提高羊生长激素产量中的应用；

或，权利要求1-9中任一中的重组载体或重组菌；

或，所述重组载体或重组菌在制备羊生长激素或提高羊生长激素产量中的应用。