[发明专利]重组胶原蛋白、制备方法及其应用

权利要求书

1.重组胶原蛋白α1链，其特征在于，所述重组胶原蛋白α1链为α1(Ⅰ)M1或α1(Ⅱ)M6，所述α1(Ⅰ)M1由人Ⅰ型胶原蛋白α1链的天然全长氨基酸序列经过氨基酸突变获得，所述α1(Ⅱ)M6由人Ⅱ型胶原蛋白α1链天然全长氨基酸序列经过氨基酸突变获得；所述α1(Ⅰ)M1的序列如SEQ.NO.ID.2所示，所述α1(Ⅱ)M6的序列如SEQ.NO.ID.5所示。

2.编码权利要求1所述重组胶原蛋白α1链的核苷酸。

3.根据权利要求2所述的核苷酸，其特征在于，所述编码α1(Ⅰ)M1的核苷酸序列如SEQ.NO.ID.3所示；所述编码α1(Ⅱ)M6的核苷酸序列如SEQ.NO.ID.6所示。

4.重组表达载体，含有权利要求2所述的核苷酸。

5.工程菌，所述工程菌含有权利要求4所述的重组表达载体或表达权利要求1所述重组胶原蛋白α1链，所述工程菌为巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）。

6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC NO.21891或CGMCCNO. 21892，其中保藏编号为CGMCC NO.21891的工程菌表达的是重组α1(Ⅰ)M1胶原蛋白α1链，保藏编号为 CGMCCCGMCCNO. 21892的工程菌表达的是重组α1(Ⅱ)M6胶原蛋白α1链。

7.权利要求4所述的重组表达载体或权利要求5-6任一项所述的工程菌在制备所述重组胶原蛋白α1链中的应用。

8.权利要求1所述重组胶原蛋白α1链的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）合成编码权利要求1所述重组胶原蛋白α1链的核苷酸序列；

（2）构建重组表达载体；

（3）构建工程菌、诱导表达和菌株筛选，得到表达量高的工程菌株；

（4）将筛选得到的表达量高的工程菌，高密度发酵培养；

（5）发酵上清液纯化后，冷冻干燥获得重组胶原蛋白α1链。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述表达量高的工程菌为巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC NO.21891或CGMCCNO. 21892。

10.组合物，其特征在于，所述组合物包含权利要求1所述重组胶原蛋白α1链或权利要求8-9任一项所述方法制备的重组胶原蛋白α1链。

11.制品，其特征在于，所述制品包含权利要求1所述重组胶原蛋白α1链、权利要求8-9任一项所述方法制备的重组胶原蛋白α1链或权利要求10所述的组合物，所述制品为药物、医疗器械、生物材料、组织工程产品或化妆品。

12.根据权利要求11所述的制品，其特征在于，所述制品为为细胞提供黏附、支撑、生长迁移空间的材料或作为输送营养物质与新陈代谢产物通道的材料。

13.根据权利要求12所述的制品，其特征在于，所述制品为胶原蛋白水凝胶。

14.权利要求1所述重组胶原蛋白α1链、权利要求2-3任一项所述的核苷酸、权利要求4所述的重组表达载体、权利要求5-6任一项所述的工程菌、权利要求8-9任一项所述方法制备的重组胶原蛋白α1链或权利要求10所述的组合物在制备制成品中的用途，所述制成品为药物、医疗器械、生物材料、组织工程产品或化妆品。