[发明专利]一种MLL-AF4融合基因阳性人源化动物模型构建方法及应用

说明书

本发明提供了MLL‑AF4融合基因阳性人源化动物模型的构建方法，使用所述方法构建的动物模型的组织、体液、细胞及其破碎物或提取物，其在急性淋巴细胞白血病致病机理研究以及药物或疫苗研发中的应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及人源化动物模型的构建方法及应用，具体而言，涉及基于一种MLL-AF4融合基因阳性人源化动物模型构建方法及应用。

背景技术

MLL(mixed lineage leukemia)基因异常是急性白血病中一种十分常见的染色体异常，其中由t(4；11)(q21；q23)易位而形成的MLL-AF4融合基因是急性淋巴细胞白血病中第二大常见的染色体异常，是一个独立的预后不良因素，MLL-AF4融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病患者对常规化疗耐药，即使行异基因造血干细胞移植也容易复发，往往预后差、复发率高、死亡率高。该类白血病发病机制尚不清楚，且缺乏有效的治疗手段。

白血病小鼠模型是白血病发病机制研究以及药理学实验研究必不可少的重要工具。然而，目前较为成熟的MLL-AF4融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病小鼠模型较少，且主要局限于MLL-AF4基因转染或者以细胞系构建的急性淋巴细胞白血病小鼠模型。这些建模方法较为复杂，且不能完全模拟病人体内的真实环境。因此，本领域存在对能够满足研发需求，并且构建方法更加简便易行的MLL-AF4融合基因阳性的白血病小鼠模型的需求。

发明内容

为了解决上述问题，在第一个方面，本发明的目的在于提供一种MLL-AF4 融合基因阳性人源化动物模型的构建方法，所述方法包括将MLL-AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞注入免疫缺陷的动物体内。

在具体的实施方案中，本发明的所述免疫缺陷的动物为白消安预处理的动物。

在具体的实施方案中，本发明的所述免疫缺陷的动物为重度免疫缺陷的动物。

在具体的实施方案中，本发明的所述骨髓单个核细胞经尾静脉注射给免疫缺陷的动物。

在具体的实施方案中，本发明的所述外周血单个核细胞经腹腔注射给免疫缺陷的动物。

在具体的实施方案中，本发明的所述免疫缺陷的动物为免疫缺陷的小鼠、大鼠或猕猴。

在具体的实施方案中，本发明的方法包括：(1)细胞注射前用白消安对重度免疫缺陷动物进行预处理；(2)用淋巴细胞分离液分离出MLL-AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病病人的骨髓单个核细胞和外周血单个核细胞；(3)取 2.4×10⁶个骨髓单个核细胞和2.32×10⁶个外周血单个核细胞分别经尾静脉和腹腔注射给所述重度免疫缺陷的动物体内。

在本发明的第二个方面，本发明的目的在于提供一种MLL-AF4融合基因阳性人源化动物的组织、体液、细胞及其破碎物或提取物，其特征在于，所述 MLL-AF4融合基因阳性人源化动物是使用第一方面所述的构建方法构建的。

在本发明的第三个方面，本发明的目的在于提供使用第一方面所述的构建方法构建的MLL-AF4融合基因阳性人源化动物或其组织、体液、非干细胞的细胞及其破碎物或提取物在急性淋巴细胞白血病致病机理研究以及药物或疫苗研发中的应用。

与现有技术相比，本发明的方法构建的动物模型为白血病临床前药物试验、基因治疗及白血病发病机制研究提供可靠的实验工具，并且具有以下优点：

(1)利用病人来源的MLL-AF4融合基因阳性白血病细胞构建MLL-AF4 融合基因阳性人源化的白血病动物模型方法较为简便；

(2)构建的动物模型能够稳定、真实模拟病人体内的疾病状态和环境，这对研究MLL-AF4融合基因阳性急性淋巴细胞白血病的发病机制以及靶向治疗具有重大意义，也是开展以MLL-AF4为靶点的基因编辑治疗的必须前提条件。

附图说明