[发明专利]一种基于乏氧响应的铂超纳米粒子的尿液检测方法和应用

权利要求书

1.一种基于乏氧响应的铂超纳米粒子的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将超小的铂纳米簇PtNCs表面进行氨基化，然后借助乏氧响应的4,4’-二羧酸偶氮苯azo与铂纳米簇PtNCs共价连接得到铂超纳米粒子PNCA，其中4,4’-二羧酸偶氮苯azo上的羧基是通过EDC/NHS反应活化后与PtNCs进行共价连接；

(2)并在静电吸附的作用下，在PNCA纳米粒子最外层包裹上可以特异性靶向肿瘤细胞表面CD44受体的透明质酸HA，制得PNCAH铂超纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的铂纳米簇PtNCs为利用六水合氯铂酸和柠檬酸三钠通过一锅热法合成，其中柠檬酸三钠在反应中起到还原剂和保护剂的角色，反应中用到的六水合氯铂酸的浓度为1mM，柠檬酸三钠的浓度为3.88mM，反应温度为100℃。

3.根据权利要求2所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的氨基化过程采用的分子为巯基乙胺，同时氨基化的过程中还加入了巯基乙醇防止铂纳米簇发生聚集，氨基化反应时巯基乙胺的浓度为0.4mM，巯基乙醇的浓度为0.6mM，反应时间为3h。

4.根据权利要求1所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的EDC/NHS活化过程，EDC的中文名为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，NHS的中文名为N-羟基琥珀酰亚胺，EDC反应时的浓度是30mM，NHS反应时的浓度为3.3mM，活化时间为2h；所述的铂纳米簇PtNCs与4,4’-二羧酸偶氮苯azo的质量比为90-100:1-6，反应时间为12h。

5.根据权利要求1所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述的HA的包裹过程，HA与加入的PNCA纳米粒子的质量比为1:2，反应时间为2h。

6.权利要求1至5所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的尿液检测方法，其特征在于包括如下步骤：当把具有靶向效果的铂超纳米粒子递送进细胞或者小鼠，可在肿瘤部位乏氧解离为许多小的PtNCs，重新进入血液循环，进而可以经肾脏排泄到尿液中进行肿瘤状态的检测。

7.根据权利要求6所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的尿液检测方法，其特征在于：所述的检测过程，在肿瘤乏氧环境中，N＝N键被破坏，PNCA纳米粒子发生解离释放出PtNCs，PtNCs在体内的最佳肾脏代谢时间为4h。

8.根据权利要求7所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的尿液检测方法，其特征在于：利用PtNCs优异的过氧化氢酶活性，能够催化过氧化氢产生氧气进行检测，从而进行疾病状态的读出。

9.根据权利要求7所述的基于乏氧响应的铂超纳米粒子的尿液检测方法，其特征在于：细胞使用的是MDA-MB-231三阴性乳腺癌细胞，小鼠为BALB/c裸鼠，当把该铂超纳米粒子递送进细胞或者小鼠，实现纳米材料在肿瘤部位的解离以及肿瘤状态的诊断。

10.权利要求1所述的铂超纳米粒子PNCAH作为外源性生物标志物的应用。