[发明专利]一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法

说明书

本发明涉及细胞检测技术领域，具体涉及一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法。一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，包括以下步骤：确定待滴定抗体的最低滴定浓度；复苏待检测产品并配制单染和组合染实验组的抗体稀释液；对单染和组合染实验组进行补偿，确定每个maker的阳细胞比例；计算TCR阳性T细胞占总白细胞的比例。本发明先对待滴定的抗体处理和采样分析，确定最终滴定浓度；然后对待检测产品进行复苏，配置单染和复合染实验组的抗体稀释液，并对各实验组进行补偿，使用相同的逻辑圈门和直方图确定每个maker的阳性细胞比例，计算单染和复合染实验组阳性细胞比例，从而准确可靠的计算出TCR阳性T细胞占总白细胞的比例。

技术领域

本发明涉及细胞检测技术领域，具体涉及一种特异性检测产品中TCR阳性 T细胞比例的流式方法。

背景技术

T细胞抗原受体T细胞(T cell receptorT cells，TCR-T)是将嵌合抗原受体(融合抗原结合域及T细胞信号结构域)或者TCRα/β异二聚体导入T细胞制备 而成。TCR-T细胞产品发挥肿瘤特异性杀伤作用的有效成分是TCR阳性的T细 胞。

流式细胞术(Flow Cytometry)是基于流式细胞仪和荧光素偶联抗体的荧光驱 动的细胞分选(Fluorescence-activated Cell Sorting，FACS)技术。基本原理为：荧 光染料偶联的抗体与目标蛋白质结合在细胞上，细胞通过激光束，该激光束激 发荧光染料并发出一定波长的光，光信号被检测器收集并被仪器分析软件以散 点图、直方图或者其他形式表示，以获得某一荧光信号标记的免疫细胞所占的 比例。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所 公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式 方法，以解决现有技术中流式细胞术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，包括以下步骤：

(1)将待滴定抗体用1％FBS 2倍梯度稀释，设置多个浓度点，并设置1 个空白对照组，然后在相同条件下进行流式样本处理及采样分析；

(2)对数据进行处理，统计所有实验组阴性和阳性细胞群的平均荧光强度 以及染色指数，并计算信噪比；

(3)对染色指数、信噪比和抗体浓度进行分析，确定最终滴定浓度；

(4)将待检测产品在不同的时间复苏培养，根据步骤(3)确定的最终滴 定浓度，分别使用1％FBS将其配置成单染和组合染实验组的抗体稀释液；

(5)对单染和组合染实验组进行补偿，使用相同的逻辑圈门和直方图形式 确定每个maker的阳性细胞比例，计算单染和组合染实验组阳性细胞比例的 CV、SD和绝对差；

(6)若单染和组合染实验组阳性细胞比例的CV、SD和绝对差满足设计要 求，则计算TCR阳性T细胞占总白细胞的比例。

作为优选，步骤(1)中带滴定的抗体为Fixable Viability Stain 780抗体、 LA-A0201 PE抗体和BV421MouseAnti-Human CD3抗体。

作为优选，步骤(3)中确定染色指数值最大，信噪比趋于最大值所对应的 抗体浓度为最终滴定浓度。

作为优选，步骤(4)中待检测样品复苏培养时间为24-48h。