[发明专利]一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法在审
| 申请号： | 202111456850.9 | 申请日： | 2021-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN114216836A | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 吴丽杰;刘超 | 申请（专利权）人： | 星汉德生物医药（大连）有限公司 |
| 主分类号： | G01N15/10 | 分类号： | G01N15/10;G01N1/30;G01N33/50 |
| 代理公司： | 大连中奥丰汇知识产权代理事务所(普通合伙) 21257 | 代理人： | 张应刚 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 特异性 检测 产品 tcr 阳性 细胞 比例 方法 | ||
1.一种特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将待滴定抗体用1％FBS 2倍梯度稀释，设置多个浓度点，并设置1个空白对照组，然后在相同条件下进行流式样本处理及采样分析；
(2)对数据进行处理，统计所有实验组阴性和阳性细胞群的平均荧光强度以及染色指数，并计算信噪比；
(3)对染色指数、信噪比和抗体浓度进行分析，确定最终滴定浓度；
(4)将待检测产品在不同的时间复苏培养，根据步骤(3)确定的最终滴定浓度，分别使用1％FBS将其配置成单染和组合染实验组的抗体稀释液；
(5)对单染和组合染实验组进行补偿，使用相同的逻辑圈门和直方图形式确定每个maker的阳性细胞比例，计算单染和组合染实验组阳性细胞比例的CV、SD和绝对差；
(6)若单染和组合染实验组阳性细胞比例的CV、SD和绝对差满足设计要求，则计算TCR阳性T细胞占总白细胞的比例。
2.根据权利要求1所述的特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，步骤(1)中带滴定的抗体为Fixable Viability Stain 780抗体、LA-A0201 PE抗体和BV421MouseAnti-Human CD3抗体。
3.根据权利要求1所述的特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，步骤(3)中确定染色指数值最大，信噪比趋于最大值所对应的抗体浓度为最终滴定浓度。
4.根据权利要求1所述的特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，步骤(4)中待检测样品复苏培养时间为24-48h。
5.根据权利要求2所述的特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，步骤(5)中对单染和组合染实验组进行单染管补偿，补偿后不同通道之间补偿值均小于1。
6.根据权利要求4所述的特异性检测产品中TCR阳性T细胞比例的流式方法，其特征在于，步骤(6)中所有maker单染和组合染实验组的直方图无明显差异，且目的细胞比例的CV≤20.00％，绝对差值≤5.00％，SD≤5.00；同时复苏培养后检测产品TCR阳性T细胞比例检验所有maker单染和组合染试验直方图无明显差异，各目的细胞CV＜10.00％，绝对差值＜3.00％，SD＜2.00时，实验设计满足。
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