[发明专利]一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株及其获取方法

说明书

本发明提供了一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株及其获取方法，属于基因工程技术与生物制品制备技术领域。提供一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株和提高BHV‑1毒株编辑效率。本发明提供了一种牛疱疹病毒(Bovine herpes virus type Ⅰ)1型UL41缺失毒株，所述牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株是以通过敲除亲本病毒中UL41基因得到的毒株，本发明所构建的牛疱疹病毒1型缺失毒株在病毒生物学特性上与亲本毒株表现出一定的差异性，即缺失毒株的复制起始时间要早于亲本毒株约12小时，且相较于亲本毒株，缺失毒株对酸性环境和温度变化表现出更强的敏感性，而对碱性环境的敏感程度与亲本毒株相近。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株及其获取方法。

背景技术

牛疱疹病毒1型(Bovine herpes virus type Ⅰ，BHV-1，以下简称为BHV-1)是造成牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis，IBR)的主要病原体，因此又称为牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)。BHV-1为双链DNA病毒，基因组全长约为138kb，编码73种蛋白，其中包括gB、gC、gD和gE等11种包膜糖蛋白。BHV-1可在三叉神经建立潜伏感染，组织嗜性较为广泛，可感染呼吸系统、生殖系统、神经系统和眼结膜等，还有垂直传播的特性。临床上，患病肉牛育肥率大幅降低，繁殖率显著下降，且严重影响奶牛产奶量，对世界范围内养牛行业有着巨大的经济冲击。19世纪50年代，美国首次发现BHV-1，我国于20世纪80年代从新西兰进口牛只中首次分离获得BHV-1。该病毒呈世界范围流行，世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties，OIE)将牛传染性鼻气管炎列为通报性疫病，我国将其列为二类动物疫病。BHV-1在我国的感染率相对较高，2013年之前BHV-1感染率为32％，2013年以后升至43％，目前我国的防疫手段主要为灭活疫苗等常规疫苗免疫。因灭活疫苗和弱毒疫苗存在一些缺点，包括免疫期短，免疫原性较差，不能在体内增殖(灭活疫苗)；生物安全性不高，运输受环境影响大(弱毒疫苗)等，故而，对BHV-1新型疫苗的研制显得尤为重要。较欧洲国家而言，我国对BHV-1基因缺失疫苗的研究较晚，但也通过基因工程同源重组技术构建了gE-/TK-双基因缺失BHV-1毒株，gG-/TK-双基因缺失疫苗，gN-/TK-/gG-三基因缺失毒株。近年来，亚单位疫苗，DNA疫苗，基因缺失疫苗和病毒活载体疫苗等基因工程疫苗的研究技术越发成熟与进步，但对BHV-1基因编辑疫苗的优化仍需要进行探索，原因在于BHV-1对常用疫苗生产适用的动物细胞敏感性存在较大差异，不能在猴肾、小鼠肾、豚鼠肾、鸡胚肾细胞以及KB和L细胞内增殖，也不能在鸡胚内增殖，而在源于牛的多种细胞均可得到良好扩增，且在实现质粒核酸类分子转染的过程中，鲜有适宜转染的牛源动物细胞系，常用于科学研究且适于BHV-1繁殖的MDBK细胞转染效率极低。为进一步加快BHV-1缺失毒株的研究与构建进程，我们提出一种更为便捷快速的BHV-1缺失毒株构建方法，以加速国内对BHV-1基因缺失毒株的研究进程，加快对基因缺失疫苗免疫效果的评估。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株，为了提高sgRNA的转染效率、提高BHV-1毒株基因编辑效率和为制备BHV-1基因缺失疫苗奠定基础。

本发明提供了一种牛疱疹病毒(Bovine herpes virus type Ⅰ)1型UL41缺失毒株，所述牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株是以通过敲除亲本病毒中UL41基因得到的毒株。

进一步地限定，所述UL41基因序列如SEQ ID NO.9所示。

进一步地限定，所述亲本病毒为牛疱疹病毒1型毒株。

本发明提供上述的牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株的构建方法，所述构建方法步骤如下：