[发明专利]一种核酸酶去除核黄素中的残留DNA的方法

说明书

本发明涉及核黄素提取技术领域，特别是一种核酸酶去除核黄素中的残留DNA的方法。本发明的酶催化去除残留DNA工艺包括核黄素粗品调浆、核黄素悬浊液调pH、超声处理、酶解反应、过滤及喷雾干燥。采用本发明的酶催化去除残留DNA工艺，可高效的发挥酶的作用，避免了常规方法中酶解反应不充分的问题，清洁有效的去除核黄素产品中残留的转基因成分，解决了核黄素作为的转基因产品的安全风险问题。

技术领域

本发明涉及核黄素提取技术领域，特别是一种核酸酶去除核黄素中的残留DNA的方法。

背景技术

核黄素(riboflavin)是一种黄色、光敏感、微溶于水的固体，是核醇与6，7-二甲基异咯嗪的缩合物，又名维生素B2(简称VB2)，是人体必需的一种水溶性维生素。大多数微生物和植物自身具有体内合成核黄素的功能，而人和动物都缺乏核黄素合成途径。而核黄素是人和动物的必需生长因子，具有广泛的生理功能，其在临床医疗、饲料加工、食品工业及化妆品制造领域具有重要价值。

目前国内外商品化的核黄素生产，几乎都是通过微生物发酵法进行的。然而天然的微生物生产核黄素的能力较弱，国内企业生产核黄素的菌株多为枯草芽胞杆菌基因工程菌株。基因工程是利用重组技术，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸(基因)进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新特性的生物类型。枯草芽胞杆菌基因工程菌株虽然经过改造提升了核黄素产量，但改造过程中引入的外源基因易出现在核黄素产品中，使我国企业核黄素产品的出口受到了多个国家法规的限制。虽然市面上有多种核酸酶可以有效的水解溶解于水中的DNA成分，但应用在核黄素生产领域时，由于核黄素粗品微溶于水，加入核酸酶后会面临酶解反应不充分的情况，问题依然没有得到解决。现有提取工艺为提高产量降低成本，未涉及专门去除转基因成分的步骤，因而导致了核黄素产品中转基因成分残留的风险。

因此，在制备核黄素产品过程中，需要对去除残留DNA工艺进行研究，找到一种高效、清洁、合理应用核酸酶的方法对核黄素粗品进行处理，以获得不含转基因成分的核黄素产品。

发明内容

本发明提供一种采用核酸酶去除核黄素粗品中的残留DNA的工艺，去除了现有发酵法生产核黄素产品中存在的转基因成分残留，避免了核黄素产品出口受限的问题，同时进一步提高了核黄素产品的安全性。

本发明的技术方案为：一种核酸酶去除核黄素中的残留DNA的方法，包括以下步骤：

步骤1.调浆：将核黄素粗品加入到水中，搅拌均匀形成核黄素悬浊液，并调整温度恒定在25～45℃之间；

步骤2.调pH：检测核黄素悬浊液pH，并依据检测结果向核黄素悬浊液中加入盐酸或氢氧化钠溶液，调节pH稳定在6～10；

步骤3.超声：保持搅拌及温度为25～45℃，向核黄素悬浊液施加90～110W功率的超声并持续2～5h，然后调整超声功率至60～90W；

步骤4.酶解：保持温度稳定为25～45℃、pH稳定为6～10、超声功率稳定为60～90W，向核黄素悬浊液内加入全能核酸酶进行酶解反应，所述加入的全能核酸酶与核黄素粗品的比例为1：10³～1：10⁷，至反应完成；

步骤5.再调pH：依据步骤2的pH调节结果向核黄素悬浊液中加入盐酸或硫酸溶液，调节pH稳定在3～5；

步骤6.超声：保持搅拌及温度为25～45℃，向核黄素悬浊液施加100～200W功率的超声并持续1～2h，然后调整超声功率；

步骤7.再酶解：调整温度稳定至50～70℃，并保持pH稳定为3～5、超声功率稳定为100～200W，向核黄素悬浊液内加入5'-磷酸二酯酶进行酶解反应，所述加入的5'-磷酸二酯酶与核黄素粗品的比例为1：10³～1：10⁷，至反应完成；