[发明专利]一种固定化链孢霉菌的制备方法

说明书

本发明提供了一种固定化链孢霉菌的制备方法，此方法先使用多孔沸石吸附菌液，后加入海藻凝胶包埋的方法对链孢霉菌进行固载。此方法使用的是先固载到分子筛上，再用海藻酸钙凝胶包埋法进一步固定，固载的更加牢固，重复使用五次，未见催化性能有明显的降低，较现有固载型催化剂，重复使用率提高，大大降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及一种一种固定化链孢霉菌的制备方法，属于生物制药领域。

背景技术

D-泛酸是维生素B族物质，是辅酶A的组成部分，广泛参与糖、脂肪、蛋白质代谢。D-泛酸有利于各种营养物质的吸收和利用。因此，D-泛酸广泛用于医药、食品、饲料工业等。但因D-泛酸不稳定，其盐的形式——D-泛酸钙就成为研究的热点。而D-泛酸钙的合成核心步骤就是泛酸内酯的手性拆分。

现在工业上制备D-泛酸内酯有两种方法，方法一是化学法，使用手性拆分剂对消旋泛酸内酯进行拆分，但是由于手性拆分剂价格昂贵、拆分成本高、有一定的环境污染，因此限制了此方法的使用和推广；方法二是微生物酶法拆分泛酸内酯得到D-泛酸内酯，此方法具有成本低，反应条件温和，环境污染小的优点，但也有缺点，生物酶无法回收再利用，大大增加了其成本。因此，生物酶的固载成为研究的热点。

对生物酶固载常用的方法为海藻酸钠包埋法，此方法操作简单、固载后的生物酶的活性较好，但机械强度低，重复使用后，容易破碎，从而导致生物酶流失，从而催化剂失活而无法重复使用。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种固定化链孢霉菌的制备方法，此方法先使用多孔沸石吸附菌液，后加入海藻凝胶包埋的方法对链孢霉菌进行固载。

本发明所采用的技术方案流程如下：

一种固定化链孢霉菌的制备方法，其特征在在于包含以下步骤：

S1菌液制备步骤：将甘油、蛋白胨、酵母膏、玉米浆按照一定比例配置培养液，在121℃下高温灭菌30分钟，冷却后，按一定接种量取链孢霉菌液接种后，30℃恒温培养一定时间，得到待固载菌丝细胞；

S2沸石吸附步骤： 一定型号的多孔沸石用蒸馏水洗净，沸水煮一定时间，蒸馏水洗成中性，粉碎至一定规格，在121℃下湿热灭菌30min，烘干冷却。按一定质量比与菌液进行混合，30℃搅拌一定时间，得到沸石吸附固载的链孢霉菌；

S3海藻酸钙凝胶包埋固载步骤：向上述反应液加入一定浓度的海藻酸钠，混合均匀，20℃搅拌一定时间，过滤。滤饼加入到一定浓度的氯化钙溶液，形成包裹沸石的海藻酸钙凝胶的颗粒沉淀。

优选的，步骤S1所述的甘油、蛋白胨、酵母膏、玉米浆配置培养液的比例为：2%:1%:1%:1%，所述的接种量为5%-10%，所述的培养时间为36h-72h。

优选的，步骤S2所述的一定型号的分子筛包括3A分子筛、4A分子筛、5A分子筛、13X分子筛，优选4A分子筛，所述的粉碎的规格为60目-100目，所述的沸石与培养液的质量比为1:20，所述的搅拌固载时间为48h-72h。

优选的，步骤S3所述的海藻酸钠的浓度为10g/L-30g/L，所述的搅拌时间为1h-2h，所述的氯化钙的浓度为10g/L-20g/L。

与现有技术相比，本发明有以下的创新点：

①本工艺使用的是先固载到分子筛上，再用海藻酸钙凝胶包埋法进一步固定，因此，此催化剂固载的更加牢固，重复使用五次，未见催化性能有明显的降低，较现有固载型催化剂，重复使用率提高，大大降低了生产成本；

② 本工艺固载及重复使用的步骤简单、实用，利于工业化生产。

附图说明

图1为本发明技术方案流程图。

具体实施方式