[发明专利]一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法、检测试纸条及其应用

说明书

本发明提供一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法、检测试纸条及其应用，属于分析化学和临床检测技术领域。所述检测方法包括采用竞争法，以固相免疫层析形式进行测定。所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接。所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置检测线1、检测线2和质控线。本发明通过对同型半胱氨酸和维生素B12的解离和检测过程进行优化，从而实现对上述物质的快速、灵敏和特异性检测。

技术领域

本发明属于分析化学和临床检测技术领域，具体涉及一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法、检测试纸条及其应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是一种含巯基的氨基酸，是人体内甲硫氨酸代谢过程中的重要中间代谢产物。研究发现，在疾病条件下，酶的代谢出现障碍，血液中的Hcy浓度升高。Hcy已被国际医学界认为是动脉粥样硬化和血栓、冠心病等心脑血管疾病发病的独立危险因子，其临床意义甚至已被认为超过胆固醇。此外，Hcy升高还是反映人体维生素B12缺乏的一个灵敏的生物标记物。

维生素B12（Vitamin B12，VB12），是一种含有3价钴的多环系化合物，4个还原的吡咯环连在一起变成为1个咕啉大环（与卟啉相似），是唯一含金属元素的必需水溶性维生素，在机体内的物质代谢过程中发挥重要作用，缺乏时会引起机体出现巨幼红细胞贫血，会诱发各种神经性疾病。因此，具有高选择性和灵敏度的同型半胱氨酸和VB12检测方法具有重要的价值。

现有针对同型半胱氨酸和VB12检测方法主要包括高效液相色谱-紫外光谱、原子吸收光谱(AAS)、酶联免疫吸附分析(ELISA)、分光光度法和微生物学分析法等等。但这些检测方法普遍存在检出限高、分析时间长、价格高昂、需要专业技术人员等问题。

量子点(QDs)作为一种新型的发光纳米材料，其在检测领域具有独特的光致发光，化学稳定性和出色的生物相容性。但目前基于量子点(QDs)的荧光检测体系对前体物质和检测环境要求严格，分析时间长，成本高，无法满足快速大量的检测需要，检测流程复杂；对同型半胱氨酸和VB12特异性不强。同时，同型半胱氨酸和VB12在体内是与蛋白结合而存在的，所以在检测血清或血浆等生物样本时，需要对样本进行解离，使其将同型半胱氨酸和VB12从结合蛋白上释放出来，再进行检测。然而，目前前处理过程往往过于复杂，且解离不彻底，从而导致检测结果并不准确。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法、检测试纸条及其应用。本发明通过对同型半胱氨酸和维生素B12的解离和检测过程进行优化，从而实现对上述物质的快速、灵敏和特异性检测。

本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明的第一个方面，提供一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法，所述检测方法包括采用竞争法，以固相免疫层析形式进行测定。

具体的，当待测物为同型半胱氨酸时，所述检测方法包括：

S1、将待测样品加入稀释液中进行稀释并解离，并通过酶促反应使其转化为S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）的待测物；

S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测。

其中，所述稀释液包括解离剂R1和转化剂R2，R1与R2按照体积比为7~10:1（优选为9:1）进行混合，其中解离剂R1为含有1~10 mM（优选为5 mM） DTT的Tris-HCl溶液，R2为含有1~10 U/ml（优选为5 U/ml）S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的Tris-HCl溶液，催化待测样品向SAH转化。