[发明专利]一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法、检测试纸条及其应用

权利要求书

1.一种同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括采用竞争法，以固相免疫层析形式进行测定；

所述检测方法采用基于量子点的免疫层析试纸条进行，所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接；

所述样品垫上喷涂有缓释膜；

所述样品垫由玻璃纤维素膜材质制成；

所述缓释膜由明胶、羟丙基甲基纤维素和甘油加入水中搅拌均匀后获得；

所述明胶、羟丙基甲基纤维素和甘油的质量比为1~3:1:1，所述明胶和水的质量体积比为1~3g：50ml；

所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置检测线和质控线。

2.如权利要求1所述同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

当待测物为同型半胱氨酸时，

S1、将待测样品加入稀释液中进行稀释并解离，进行加酶使其转化为S-腺苷同型半胱氨酸的待测物；

S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测；

所述稀释液包括解离剂R1和转化剂R2；其中解离剂R1含有1~10 mM DTT的Tris-HCl溶液，R2为含有1~10 U/ml的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的Tris-HCl溶液，催化待测样品向SAH转化；

其中，R1与R2按照体积比为7~10:1进行混合。

3.如权利要求1所述同型半胱氨酸和维生素B12的检测方法，其特征在于，当待测物为维生素B12时，所述检测方法包括：

S1、将待测样品加入稀释液中进行稀释并解离，经还原后在氰化物条件下转化为氰钴胺素得待测物；

S2、将上述待测物加入基于量子点的免疫层析试纸条上，对显色完成的试纸条进行荧光检测；

所述稀释液为含有硫代甘油、DTT和氰化钾的强碱溶液；其中，所述强碱溶液为0.01~0.1M的NaOH溶液，所述硫代甘油的终浓度为0.5~2 mM，DTT的终浓度为1~10mM；氰化钾的终浓度为0.001~0.01%。

4.如权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品为血液制品，所述血液制品包括全血、血清和血浆。

5.一种基于量子点的免疫层析试纸条，其特征在于，所述基于量子点的免疫层析试纸条包括底板，所述底板上依次设置有样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫，相邻各垫在连接处交叠连接；

所述样品垫上喷涂有缓释膜；

所述样品垫由玻璃纤维素膜材质制成；

所述缓释膜由明胶、羟丙基甲基纤维素和甘油加入水中搅拌均匀后获得；

所述明胶、羟丙基甲基纤维素和甘油的质量比为1~3:1:1，所述明胶和水的质量体积比为1~3g：50ml；

所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上依次设置检测线和质控线。

6.如权利要求5所述的免疫层析试纸条，其特征在于，当待测物为同型半胱氨酸时，所述结合垫喷涂有量子点标记SAH抗体和量子点标记鸡IgY抗体；二者质量比为0.5~2:1；

所述SAH抗体为SAH单克隆抗体；

所述量子点标记SAH抗体采用如下制备方法获得：

将CdSe/ZnS量子点加入MES缓冲液中进行活化，然后向其中加入EDC、NHS，然后再加入SAH单克隆抗体混合充分反应，使用硼酸盐缓冲液进行离心洗脱，复溶后稀释即得；

所述MES缓冲液为中性或弱酸性；

所述硼酸盐缓冲液为中性或弱碱性；

所述检测线包被有SAH-BSA抗原，即偶联BSA的SAH抗原；

所述质控线包被有羊抗鸡IgY抗体；

所述吸水垫为吸水板或吸水纸；

所述底板采用PVC板。