[发明专利]一种用于诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的培养基，其特征在于，包含以下组分：基础培养基、10～50ng/mL转化生长因子β1、0.5～1mM丙酮酸钠、10～50μg/mL抗坏血酸、100～300nM地塞米松、10～50μg/mL脯氨酸、10～50mg/mL牛胰岛素-转铁蛋白-硒钠。

2.如权利要求1所述的用于诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的培养基，其特征在于，所述基础培养基为高糖型DMEM培养基。

3.如权利要求1所述的用于诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的培养基，其特征在于，所述培养基还包括0.5～1.5vol％青霉素-链霉素。

4.如权利要求1～3任一项所述的用于诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的培养基在诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的应用。

5.一种诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：配制诱导培养基：将10～50ng/mL转化生长因子、0.5～1mM丙酮酸钠、10～50μg/mL抗坏血酸、100～300nM地塞米松、10～50μg/mL氨基酸、10～50mg/mL牛胰岛素-转铁蛋白-硒钠和1vol％青霉素-链霉素混合，配成所述诱导培养基；

步骤二：制备牙髓干细胞；

步骤三：将所述牙髓干细胞加入所述诱导培养基中得细胞密度为0.5～1.5x10⁶个/mL的细胞液，将所述细胞液分成每0.5～1.5mL的接种体积接种，孵育3天；

步骤四：再在所述细胞液中加入与所述步骤三中所述接种体积相等的所述诱导培养基，继续孵育3天；

步骤五：定期换液，于第15天时收集细胞，并保存。

6.一种如权利要求5所述的诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的方法，其特征在于，在所述步骤二中，选择对数生长期的牙髓干细胞进行复苏培养以制备所述牙髓干细胞。

7.一种如权利要求5所述的诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的方法，其特征在于，在所述步骤五中，所述定期换液为每3天换液一次。

8.一种如权利要求7所述的诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的方法，其特征在于，在所述步骤三中，所述定期换液为半量换液。

9.一种如权利要求5所述的诱导牙髓干细胞向软骨细胞分化的方法，其特征在于，所述孵育条件为37℃和5％CO₂。