[发明专利]一种用于血清中农、兽药及化学污染物残留的筛查方法

权利要求书

1.一种用于血清中农兽药或化学污染物残留的筛查方法，其特征在于：是基于二维液相色谱-高分辨质谱的农药、兽药或化学污染物残留中的一种或二种以上的筛查方法，

(1)取血清样品，经除蛋白、浓缩的预处理步骤；

(2)采用二维液相色谱(2D LC)分离预处理后的血清样品，通过一根捕集柱将目标残留物初步分为强极性和非极性组分，后续使两部分组分分别在不同的色谱柱上洗脱；

(3)采用高分辨质谱(MS)的全部二级质谱信息采集模式(All MS)进行数据采集，获取目标残留物的保留时间(t_R)、质核比(m/z)和二级质谱碎片(MS/MS)，获得一级质谱信息、保留时间和二级质谱信息；筛查其中的农兽药、化学污染物残留中的一种或二种以上，并对筛查结果进行定性。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，建立常用农、兽药及化学污染物中的一种或二种以上的定性数据库：

含有常用农、兽药及化学污染物中的一种或二种以上的标准品溶液稀释至浓度为1-5μg/mL，直接进入高分辨质谱进行分析，采用全扫(Full Scan)扫描模式采集一级质谱信息和保留时间；根据获得的m/z和t_R，采用靶向采集二级(Target MS/MS)的扫描模式采集二级质谱信息；由此获得常用农、兽药及化学污染物定性数据库，其中包括t_R、m/z和MS/MS碎片信息。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中取90-120μL血清样本，加入360-480μL乙腈溶液，然后旋转1分钟，将混合物在10000g，4℃条件下离心10分钟；然后移取上清液400μL，冷冻干燥；

在二维液相色谱串联-高分辨质谱(2D LC-MS)残留分析之前，冻干样品在30μL的H₂O/MeOH(1:1，v/v)的混合溶剂中重新溶解，进样5μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中采用的装置包括液相色谱泵1(1)、液相色谱泵2(25)、稀释液泵(24)、自动进样器(2)、液相色谱柱1(9)、液相色谱柱2(26)、捕集柱(16)、六通阀1(27)、六通阀2(28)、六通阀3(29)、和检测器(23)；主要包括强极性组份转移、强极性组份分离、非极性组份分离三个过程；

初始时，六通阀2(28)的3号位与4号位相连，六通阀1(27)的12号位与13号位相连，六通阀3(29)的19号位与20号位相连；液相色谱泵1(1)的输出端经过自动进样器(2)与六通阀2(28)的3号位相连，六通阀(28)的4号位通过管线与六通阀2(27)的10号位相连，六通阀1(27)的11号位与捕集柱(16)的输入端相连，捕集柱(16)的输出端与六通阀1(27)的14号位相连，六通阀1(27)的15号位通过管线与六通阀2(28)的7号位相连，六通阀2(28)的8号位与液相色谱柱1(9)的输入端相连，液相色谱柱1(9)的输出端与六通阀3(29)的17号位相连，六通阀3(29)的22号位与检测器相连；液相色谱泵2(25)与六通阀2(28)的5号位相连，六通阀2(28)的6号位和与色谱柱2(26)的输入端相连，色谱柱2(26)的输出端与六通阀3(29)的21号位相连，六通阀3(29)的20号位与19号位通过管线相连，19号位接入废液；在该位置，自动进样器(2)将复杂样品提取液进样到捕集柱(16)，样品中的强极性组组份首先流出并转移至液相色谱柱1(9)中；

待强极性组组份从捕集柱(16)完全流出后，控制六通阀1(27)切换，六通阀1(27)的10号位与15号位相连，六通阀1(27)的10号位和11号位堵死；在该位置实现强极性组组份在液相色谱柱1(9)中的分离以及液相色谱柱2(26)的平衡；

待强极性组组份在液相色谱柱1(9)中分离完成后，控制六通阀1(27)、六通阀2(28)、和六通阀3(29)同时切换，在该位置，捕集柱(16)中的非极性组组份转移到液相色谱柱2(26)中并进行分离；与此同时，完成液相色谱柱1(9)的平衡；

待非极性组组份分离完成后，控制六通阀1(27)切换；稀释液泵(24)与六通阀1(27)的12号位相连，六通阀1(27)的11号位与捕集柱(16)的输入端相连，捕集柱(16)的输出端与六通阀1(27)的14号位相连，六通阀1(27)的13号位接入废液；在该位置，实现捕集柱(16)中残留溶剂的替换。