[发明专利]一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备方法，该疫苗由猪产毒素多杀性巴氏杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、产毒素多杀性巴氏杆菌PMT毒素N端和C端蛋白与一定比例的卡波姆水佐剂混合，具有较好的免疫原性、能有效预防进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎，提高猪的产能。本发明制备的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗中除含有ZXT+Pm和AHBb抗原组分外加入rPMT‑N和rPMT‑C，除了预防由ZXT+Pm和AHBb引起的猪萎缩性鼻炎外，也避免由ZXT+Pm分泌的毒素蛋白产生的溶骨作用，加强了对猪萎缩性鼻炎的免疫保护作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种猪萎缩性鼻炎灭活疫苗及其制备 方法。

背景技术

萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)是一类慢性呼吸道疾病，以鼻腔广泛扩张和黏膜、黏膜下层及骨组织萎缩为主要特征，具有高度接触传 染性，又称为传染性萎缩性鼻炎或慢性萎缩性鼻炎，是公认的严重危害集约 化养猪场生产和发展的重要传染性疾病之一。PAR主要由产毒素多杀性巴氏 杆菌和支气管败血波氏杆菌感染引起，常与其他类呼吸道疾病发生继发感染， 如猪支原体病、猪蓝耳病、猪喘气病等。此病流行范围广，世界各地普遍发 生，在养猪业发达地区发病率相对较高，猪群的病原检出率较高，是危害规 模化养猪场的主要疾病之一，已被世界动物卫生组织列入B类疾病。因此开 发更为有效、安全的猪萎缩性鼻炎灭活疫苗已成为迫切的需要。

目前猪萎缩性鼻炎分为进行性萎缩性鼻炎和非进行性萎缩性鼻炎，进行 性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)，主要由多杀性巴氏杆菌 (Pasteurellamultoeida，Pm)的产毒菌株(DNT+Pm)引起(多为D型，少数为A 型)；另一种是非进行性萎缩性鼻炎(Non-progressive atrophie rhinitis，NPAR)， 主要由支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的I相菌引起。后 者单独感染时，则鼻腔病变较轻，当两者混合或继发感染时，则鼻腔病变很 重。

PAR的病原为波氏杆菌属的支气管败血波氏杆菌(Bb)以及产毒性多杀 性巴氏杆菌(Pm)。Bb革兰氏染色呈阴性，无芽胞的短杆菌，有周鞭毛，能 运动；有荚膜，大多呈两极染色，成对或散在排列，可分为Ⅰ相菌、Ⅱ相菌、 Ⅲ相菌3种菌相，但有致病作用的为Ⅰ相菌，典型的Ⅰ相菌呈珍珠状或半圆 形，直径约小于1mm，白色、光滑致密，β溶血环边界不清晰。鲍-姜氏培养 基(BG)中加入5％～10％的无菌脱纤维绵羊全血可使菌落保持在Ⅰ相菌。临 床研究证明单一的支气管败血波氏杆菌感染发病不严重，鼻骨的缺陷可再生， 属于非进行性萎缩性鼻炎。多杀性巴氏杆菌(Pm)属于革兰氏阴性菌，两端 钝圆呈球状或短杆状，跟Bb的相同之处是不能形成芽孢，不同的是Pm不 能运动。根据脂多糖抗原分类，Pm菌株可分为5个荚膜血清组(A，B，D， E和F)和16个体细胞血清型(1至16)，而血清型A和D是引起进行 性猪萎缩性鼻炎的病原体之一，A型和D型多杀性巴氏杆菌可产生外毒素。 研究表明：多杀巴氏杆菌具有各种毒力因子，包括毒素、粘附素和菌毛，尤 其是皮肤坏死毒素PMT危害最大，皮肤坏死毒素PMT是一种大小约146kDa 的蛋白。

猪萎缩性鼻炎感染后症状多在3～4周龄或断奶猪中出现，发病日龄与发 病情况呈负相关。病猪呈现不同程度的卡他性鼻炎特征，频繁打喷嚏、呼吸 不畅且伴有有鼾声等；仔猪表现出食欲下降，鼻孔不断浆液性或黏液性脓性 分泌物，但病情较轻时可恢复正常。感染后期，病猪鼻甲骨和梁骨在炎症刺 激下开始萎缩变形，鼻甲骨病变由腹侧向背侧延伸，两边鼻孔大小不一，鼻 端向病侧倒歪，“歪鼻子病”因此而来。

随着对猪萎缩性鼻炎致病机制的研究，预防该病最好的方法为疫苗免疫。 目前市场上商品化疫苗主要为灭活菌苗和类毒素苗，且发现类毒素苗的免疫 效果优于灭活菌苗，但都不能达到理想的效果。因此本研究采用灭活菌苗 (ZXT+Pm和AHBb)加上重组多杀性巴氏杆菌毒素蛋白((rPMT-N和 rPMT-C))一方面可以保护仔猪不受Bb和Pm的攻击作用，另一方面也避免 仔猪因为T+Pm产生的毒素蛋白溶骨作用，从而更全面的预防和保护仔猪发 生猪萎缩性鼻炎。