[发明专利]一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法

说明书

本发明公开了一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法。该方法采用HPLC对奥贝胆酸样品中的对甲苯磺酸乙酯进行定量分析，检测步骤如下：步骤一、配制标准溶液和待测供试品溶液，包括标准储备溶液的配置，标准溶液的配置，供试溶液的配置；步骤二、选定色谱条件，选择色谱柱为ThermoSyncronisC18；流动相A为0.1％～0.3％的磷酸溶液用三乙胺调pH至3.0±0.2，流动相B为乙腈，稀释剂为甲醇，检测波长为225nm，选定梯度洗脱条件为50％A，0min～50％A，15min～25％A，20min～25％A，30min～50％A，35min～50％A，45min；对甲苯磺酸乙酯保存时间为13.5±0.1min；步骤三、进行色谱测定并计算奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的含量。

技术领域

本发明涉及药品基因毒性杂质检测技术领域，具体是指一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法。

背景技术

原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种常见的自身免疫性肝胆疾病，目前，熊去氧胆酸是FDA唯一批准用于治疗PBC的药物，但熊去氧胆酸与法尼醇X受体激动剂的亲和力较低，临床上40％～50％患者对熊去氧胆酸的治疗效果并不明显；奥贝胆酸，又名6-α-乙基鹅去氧胆酸，6-乙基鹅去氧胆酸，是20年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，针对熊去氧胆酸没有充分应答或不能耐受的患者，因此在市场上具有广阔的前景。

对甲苯磺酸作为奥贝胆酸合成过程中使用的催化剂，可能会和溶剂乙醇反应生成基因毒性杂质对甲苯磺酸乙酯。根据ICH对药品中基因毒性杂质残留的要求，计算出对甲苯磺酸乙酯每日最大摄入量为1.5μg/天，而奥贝胆酸的口服量最大为10mg/天，因此计算出奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的限度为150ppm/天(1ppm即为1ug/g或1g/t)。

对甲苯磺酸乙酯：英文名称：Ethyl p-toluenesulfonate，CAS：80-40-0，分子式：C₉H₁₂O₃S；分子量：200.25，结构式如下所示：

近几年基因毒性杂质成为药物研究中关注的焦点，其可能会对DNA产生损害，引发癌症，对甲苯磺酸乙酯作为基因毒性杂质，因此必须严格控制。经检索，目前几乎没有关于奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯残留检测方法的发明报道，而关于其它药物中对甲苯磺酸乙酯的残留检测方法的专利文件中多为UHPLC-MS的方法，该方法检测成本昂贵、操作复杂、对检测人员要求高，市场普及率不高。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有技术中的不足之处，提供一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法，所采用的方法简单方便，将现有报道中昂贵的UHPLC-MS检测器更换为实验室中最普通常见的紫外检测器，且不需要对样品进行衍生化等预处理。该方法具有专属性强、灵敏度高，重复性好和准确性高等优点，能快速的对奥贝胆酸中的对甲苯磺酸乙酯进行定量分析。

为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法，采用HPLC检测方法对奥贝胆酸样品中的对甲苯磺酸乙酯进行定量分析，检测步骤如下：

步骤一、配制标准溶液和待测供试品溶液

1)标准储备溶液的配置：精密称定对甲苯磺酸乙酯，加稀释剂配制成浓度为0.02mg/ml的溶液a；

2)标准溶液的配置：移取溶液a，加稀释剂稀释，混匀，配制成浓度为0.2μg/ml的对甲苯磺酸乙酯的标准溶液b；

3)供试溶液的配置：取供试品精密称定，加稀释剂配制成浓度为80mg/ml的供试溶液c；

所述稀释剂为甲醇；

步骤二、选定色谱条件

色谱柱：Thermo Syncronis C18；