[发明专利]一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法

权利要求书

1.一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法，采用HPLC检测方法对奥贝胆酸样品中的对甲苯磺酸乙酯进行定量分析，其特征在于，所述检测步骤如下：

步骤一、配制标准溶液和待测供试品溶液

1)标准储备溶液的配置：精密称定对甲苯磺酸乙酯，加稀释剂配制成浓度为0.02mg/ml的溶液a；

2)标准溶液的配置：移取溶液a，加稀释剂稀释，混匀，配制成浓度为0.2μg/ml的对甲苯磺酸乙酯的标准溶液b；

3)供试溶液的配置：取供试品精密称定，加稀释剂配制成浓度为80mg/ml的供试溶液c；

所述稀释剂为甲醇；

步骤二、选定色谱条件

色谱柱：Thermo Syncronis C18；

流动相A：0.1％～0.3％的磷酸溶液，用三乙胺调pH至3.0±0.2；

流动相B：乙腈；

检测波长：225nm；

梯度洗脱条件为：50％A，0min～50％A，15min～25％A，20min～25％A，30min～50％A，35min～50％A，45min；

所述对甲苯磺酸乙酯保存时间为13.5±0.1min；

步骤三、进行色谱测定并计算奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的含量

分别取溶液b和溶液c各20μl进样，按照外标法计算奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的含量。

2.根据权利要求1所述的奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法，其特征在于，所述检测步骤如下：

步骤一、配制标准溶液和待测供试品溶液

1)标准储备溶液的配置：精密称定对甲苯磺酸乙酯50mg，置25ml容量瓶中，加色谱甲醇稀释至刻度，混匀；再精密移取1.0ml置100ml容量瓶中，加色谱甲醇稀释至刻度，混匀，得溶液a；

2)标准溶液的配置：移取1.0ml溶液a置100ml容量瓶中，加色谱甲醇稀释至刻度，混匀，即得对甲苯磺酸乙酯0.2μg/ml的标准溶液，得溶液b；

3)供试溶液的配置：取供试品800mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，即得每1ml中含80mg的供试溶液，得溶液c；

所述稀释剂为甲醇；

步骤二、选定色谱条件

色谱柱：Thermo Syncronis C18；

流动相A：0.1％的磷酸溶液，三乙胺调pH至3.0；

流动相B：乙腈；

检测波长：225nm；

梯度洗脱条件为：50％A，0min～50％A，15min～25％A，20min～25％A，30min～50％A，35min～50％A，45min；

所述对甲苯磺酸乙酯保存时间为13.5±0.1min；

步骤三、进行色谱测定并计算奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的含量

分别取溶液b和溶液c各20μl进样，按照外标法计算奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的含量。

3.根据权利要求1或2所述的奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：

色谱柱：Thermo Syncronis C18，250×4.6mm×5.0μm；

流动相A：1.0ml磷酸置于1000ml水中，用三乙胺调节pH至3.0；

流动相B：乙腈

稀释剂：甲醇

检测波长：225nm；

流速：1.0ml/min；

柱温：35℃；

进样量：20μl。